外源hTERT基因对原代培养肝细胞增殖作用的研究

来源 :中华肝胆外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangwenhuai
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目的 探讨表达hTERT蛋白的重组腺病毒rAd-hTERT感染体外原代培养的肝细胞后对其增殖情况的影响.方法 将表达hTERT蛋白的重组腺病毒rAd-hTERT感染体外原代培养的肝细胞.同时设空载体对照组及空白对照组.通过定量PCR及Western-blot检测基因在细胞中的表达情况;MTI法观察其对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测rAd-hTERT对细胞周期和凋亡的影响.结果 (1)以50MOI rAd-hTERT感染肝细胞可明显促进其生长增殖,但不会引起细胞毒性作用.(2)定量PCR在转录水平检测rAd-hTERT感染后的细胞中hTERT表达量明显增加.(3)Western-blot在蛋白水平验证rAd-hTERT感染后的细胞中hTERT蛋白的表达及其蛋白活性.(4)流式细胞DNA含量分析显示,rAdhTERT可引起肝细胞周期S+G2/M期增加,并抑制细胞的凋亡.结论 rAd-hTERT在体外能有效促进原代肝细胞的生长.与阴性对照比较,同期生长的肝细胞S+G2/M期细胞增加,凋亡细胞减少(P<0.05),并未引起细胞的不典型增生表现。

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