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摘 要:建立反相高效液相色谱法测定养脾散中桂皮醛的含量。方法:采用奥泰公司C18色谱柱(220mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸溶液(38:62)为流动相,检测波长为290nm,流速为1.0ml/min,柱温为30℃。桂皮醛在10~100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。桂皮醛平均回收率分别为99.6%。结论:本法简便、准确,可用于养脾散中桂皮醛的含量测定。
关键词:养脾散;含量;测定
养脾散具有养脾健胃,开郁消食的功效。养脾散用于脾胃虚弱、水土不服引起的消化不良、饮食积滞、腹泻、食欲不振、面黄肌瘦等。养脾散由肉桂、薏苡仁、麦芽、丁香、砂仁、莲子、老范志万应神曲、甘草、山橘干等组成。肉桂(拉丁学名:Cinnamomum cassia Presl),又名玉桂、牡桂、玉树、大桂、辣桂、平安树、中国桂皮,为樟科植物肉桂的干燥树皮。肉桂常用于阳痿、目赤咽痛、虚寒吐泻、宫冷、腰膝冷痛、阳虚眩晕、经闭、痛经等。《药性论》记载:“主治:几种心痛,杀三虫,主破血,通利月闭,治软脚,痹、不仁,胞衣不下,除咳逆,结气、痈痹,止腹内冷气,痛不可忍,主下痢,鼻息肉。杀草木毒。”本文采用高效液相法对养脾散中的桂皮醛的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器:电子天平FA1004型(南京华欣分析仪器制造有限公司);YL9100液相色谱仪(汕头市科毅仪器设备有限公司);RU超纯水机(上海同田生物技术有限公司);长城狮鼎SHB-III型台式循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);美国泽拉布Super超越系列全触屏超纯水系统(上海和泰仪器有限公司);天星进样瓶清洗机TX-500型(北京天星科仪科技有限公司)。
1.2 色谱柱:奥泰公司C18色谱柱(220mm×4.6mm,5μm)。
1.3 对照品:桂皮醛
1.4 试剂:醋酸钠(盛阳润泽(北京)科技有限公司)、冰醋酸(杭州萧山创益化工仪器有限公司)、甲醇(昆山诺普森实验室用品科技有限公司)、三乙胺(昆山诺普森实验室用品科技有限公司)、磷酸二氢铵(昆山诺普森实验室用品科技有限公司)、乙腈(昆山诺普森实验室用品科技有限公司)。
1.5 试药:养脾散
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果,确定色谱条件如下[1-6]。流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(38:62)为流动相,检测波长:290nm,流速:1.0m·min-1。柱温:30℃。理论板数按桂皮醛峰计算应不得低于2500。
2.2 对照品溶液的制备
取在60℃减压干燥4小时的桂皮醛对照品适量,精密称定,加流动相制成每lml含0.02μg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物适量,精密称定,加15毫升甲醇溶液超声处理0.5小时,放冷,滤过,滤液置25ml量瓶中,用少量甲醇溶液分次洗涤容器和残渣,洗液滤人同一量瓶中,加甲醇溶液至刻度,摇匀,即得。
2.4 精密度试验
精密称取桂皮醛对照品适量,加流动相使溶解,制成浓度为0.02μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件,精密吸取10μl,连续进样6次,记录峰面积。结果,RSD=0.86%,表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取适量桂皮醛对照品,加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL,注人液相色谱仪,依照2.1项下的色谱条件测定,记录色谱峰。以峰面积(Y)为纵坐标,对照品进样量(X)为横坐标,绘制标准曲线。结果表明,桂皮醛在0.01~0.32μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的桂皮醛样品6份,按测定方法项下的方法制备供试品溶液,测定含量,并计算样品的RSD值,结果RSD为0.88%,结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
取对照品适量,精密称取已知含量的样品9份,置量瓶中,分别精密加入桂皮醛对照品,按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验,计算回收率为99.6%,RSD为0.71%。
2.8 样品含量测定
依照上述含量测定方法,测定养脾散三批样品。
3 讨论
分别考察甲醇-0.03mol·L-1醋酸铵(60∶40),甲醇-水(45∶55),乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸(2:2:30:80),乙腈-0.1%磷酸溶液(38:62)不同比例的流动相,结果以乙腈-0.1%磷酸溶液(38:62)为流动相为流动相,供试品各峰分离效果最好,故选用乙腈-0.1%磷酸溶液(38:62)为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好,可用于养脾散中桂皮醛的含量测定。
参考文献
[1]陈娴雯,李煌,陈立典,徐伟,褚克丹,阙金花,方宇骅.HPLC法同时测定栝楼桂枝汤中6种成分的含量[J].福建中医药大学学报,2014(02).
[2]袁鵬飞,马雅静,苏丹,尚明英,徐风,刘广学,Niloufar Iranmanesh,李兰芳,姜廷良,蔡少青.HPLC方法测定肉桂和桂枝中七种苯丙素类成分的含量(英文)[J]. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences,2015(09).
[3]蒋晔,郝福,李艳荣,任淑萌.HPLC同时测定桂枝颗粒中桂皮酸、芍药苷、甘草酸含量[J].中国中药杂志,2008(02).
[4]侯小涛,郝二伟,秦健峰,韦金锐,焦杨,易湘茜,黄丽贞,谢金玲,罗花,张笮晦,林瑜,邓家刚,张铁军.肉桂的化学成分、药理作用及质量标志物(Q-marker)的预测分析[J].中草药,2018(01).
[5]刘威,李红娟,张帅,萧伟,张振秋.HPLC测定不同商品规格桂枝中香豆素、肉桂醇、肉桂酸、桂皮醛的含量[J].中国实验方剂学杂志,2013(18).
[6]马蓉蓉,唐意红,孙兆林,季宇彬,黄成钢.RP-HPLC测定不同产地肉桂中桂皮醛和肉桂酸的含量[J].中国现代中药,2008(04).
关键词:养脾散;含量;测定
养脾散具有养脾健胃,开郁消食的功效。养脾散用于脾胃虚弱、水土不服引起的消化不良、饮食积滞、腹泻、食欲不振、面黄肌瘦等。养脾散由肉桂、薏苡仁、麦芽、丁香、砂仁、莲子、老范志万应神曲、甘草、山橘干等组成。肉桂(拉丁学名:Cinnamomum cassia Presl),又名玉桂、牡桂、玉树、大桂、辣桂、平安树、中国桂皮,为樟科植物肉桂的干燥树皮。肉桂常用于阳痿、目赤咽痛、虚寒吐泻、宫冷、腰膝冷痛、阳虚眩晕、经闭、痛经等。《药性论》记载:“主治:几种心痛,杀三虫,主破血,通利月闭,治软脚,痹、不仁,胞衣不下,除咳逆,结气、痈痹,止腹内冷气,痛不可忍,主下痢,鼻息肉。杀草木毒。”本文采用高效液相法对养脾散中的桂皮醛的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器:电子天平FA1004型(南京华欣分析仪器制造有限公司);YL9100液相色谱仪(汕头市科毅仪器设备有限公司);RU超纯水机(上海同田生物技术有限公司);长城狮鼎SHB-III型台式循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);美国泽拉布Super超越系列全触屏超纯水系统(上海和泰仪器有限公司);天星进样瓶清洗机TX-500型(北京天星科仪科技有限公司)。
1.2 色谱柱:奥泰公司C18色谱柱(220mm×4.6mm,5μm)。
1.3 对照品:桂皮醛
1.4 试剂:醋酸钠(盛阳润泽(北京)科技有限公司)、冰醋酸(杭州萧山创益化工仪器有限公司)、甲醇(昆山诺普森实验室用品科技有限公司)、三乙胺(昆山诺普森实验室用品科技有限公司)、磷酸二氢铵(昆山诺普森实验室用品科技有限公司)、乙腈(昆山诺普森实验室用品科技有限公司)。
1.5 试药:养脾散
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果,确定色谱条件如下[1-6]。流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(38:62)为流动相,检测波长:290nm,流速:1.0m·min-1。柱温:30℃。理论板数按桂皮醛峰计算应不得低于2500。
2.2 对照品溶液的制备
取在60℃减压干燥4小时的桂皮醛对照品适量,精密称定,加流动相制成每lml含0.02μg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物适量,精密称定,加15毫升甲醇溶液超声处理0.5小时,放冷,滤过,滤液置25ml量瓶中,用少量甲醇溶液分次洗涤容器和残渣,洗液滤人同一量瓶中,加甲醇溶液至刻度,摇匀,即得。
2.4 精密度试验
精密称取桂皮醛对照品适量,加流动相使溶解,制成浓度为0.02μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件,精密吸取10μl,连续进样6次,记录峰面积。结果,RSD=0.86%,表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取适量桂皮醛对照品,加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL,注人液相色谱仪,依照2.1项下的色谱条件测定,记录色谱峰。以峰面积(Y)为纵坐标,对照品进样量(X)为横坐标,绘制标准曲线。结果表明,桂皮醛在0.01~0.32μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的桂皮醛样品6份,按测定方法项下的方法制备供试品溶液,测定含量,并计算样品的RSD值,结果RSD为0.88%,结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
取对照品适量,精密称取已知含量的样品9份,置量瓶中,分别精密加入桂皮醛对照品,按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验,计算回收率为99.6%,RSD为0.71%。
2.8 样品含量测定
依照上述含量测定方法,测定养脾散三批样品。
3 讨论
分别考察甲醇-0.03mol·L-1醋酸铵(60∶40),甲醇-水(45∶55),乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸(2:2:30:80),乙腈-0.1%磷酸溶液(38:62)不同比例的流动相,结果以乙腈-0.1%磷酸溶液(38:62)为流动相为流动相,供试品各峰分离效果最好,故选用乙腈-0.1%磷酸溶液(38:62)为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好,可用于养脾散中桂皮醛的含量测定。
参考文献
[1]陈娴雯,李煌,陈立典,徐伟,褚克丹,阙金花,方宇骅.HPLC法同时测定栝楼桂枝汤中6种成分的含量[J].福建中医药大学学报,2014(02).
[2]袁鵬飞,马雅静,苏丹,尚明英,徐风,刘广学,Niloufar Iranmanesh,李兰芳,姜廷良,蔡少青.HPLC方法测定肉桂和桂枝中七种苯丙素类成分的含量(英文)[J]. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences,2015(09).
[3]蒋晔,郝福,李艳荣,任淑萌.HPLC同时测定桂枝颗粒中桂皮酸、芍药苷、甘草酸含量[J].中国中药杂志,2008(02).
[4]侯小涛,郝二伟,秦健峰,韦金锐,焦杨,易湘茜,黄丽贞,谢金玲,罗花,张笮晦,林瑜,邓家刚,张铁军.肉桂的化学成分、药理作用及质量标志物(Q-marker)的预测分析[J].中草药,2018(01).
[5]刘威,李红娟,张帅,萧伟,张振秋.HPLC测定不同商品规格桂枝中香豆素、肉桂醇、肉桂酸、桂皮醛的含量[J].中国实验方剂学杂志,2013(18).
[6]马蓉蓉,唐意红,孙兆林,季宇彬,黄成钢.RP-HPLC测定不同产地肉桂中桂皮醛和肉桂酸的含量[J].中国现代中药,2008(04).