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目的 评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)法在临床分离的分枝杆菌鉴定中的准确性和实用性。方法 收集2014年—2017年四川大学华西医院所有结核分枝杆菌培养阳性且抗酸染色阳性的待测菌株,并剔除同一时间、同一患者送检的重复菌株,经传统方法对硝基苯甲酸(P-nitrobenzoic acid, PNB)/噻吩-2-羧酸肼(2-thiophenecarboxylic acid hydrazide,TCH)指示剂初步鉴定。运用MALDI-TOF MS法鉴定分枝杆菌,以双重引物聚合酶链反应(duplex primer-polymerase chain reaction,Duplex-PCR)法和DNA测序法作为鉴定结果的“金标准”,统计分析MALDI-TOF MS法的特异性和敏感性。结果 共计收集237例抗酸染色阳性菌株,经分枝杆菌Duplex-PCR鉴定区分结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTC)和非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM),再用16S核糖体RNA基因测序将NTM鉴定到种,其中MTC 218例,NTM 19例,经传统鉴定方法 PNB/TCH指示剂初步鉴定,其中MTC 209例,鉴定灵敏度为95.9%、特异度为100.0%、阳性预测值为100.0%、阴性预测值为67.9%,NTM 28例,灵敏度为100.0%、特异度为95.9%、阳性预测值为67.9%、阴性预测值为100.0%。MALDI-TOF MS鉴定结果为MTC 199株,NTM 32株,其他6株,MALDI-TOF MS鉴定MTC的灵敏度为91.3%、特异度为100.0%、阳性预测值为100.0%、阴性预测值为50.0%,NTM鉴定灵敏度为68.4%、特异度为94.0%、阳性预测值为40.6%、阴性预测值为97.1%,MALDI TOF鉴定分数>1.9分的菌株168株(84.4%)。结论 MALDI-TOF MS是较好的鉴定分枝杆菌的方法,具有与传统方法较一致的鉴定结果,且成本低廉,适合临床微生物实验室常规使用。