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采用均匀设计法,从荷叶生物碱的萃取振荡时间及萃取静置时间的筛选出发,通过对邻苯二甲酸氢钾缓冲液pH值、体积以及溴甲酚绿体积等因子的研究,发现荷叶总生物碱在酸性染料比色法中的最大吸收波长为416nm,萃取振荡时间为60S,萃取静置时间为150min;最佳测定条件为缓冲液pH值2.0,缓冲液体积0.5mL,溴甲酚绿溶液体积1.0mL。同时,得回归方程y=14.12x-0.013,R2=0.9998(n=5),平均回收率达98.35%,RSD为2.11%。验证实验表明,该方法线性关系良好,重复性好,可推广应用。