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目的:
寻找出提纯神经营养蛋白的实用而有效的方法。
方法:收集SD乳鼠周围神经的雪旺细胞无血清条件培养液,离心,将上清液超滤浓缩(PM10)收集分子量大于10KDa浓缩蛋白液,经Sephadex G-75凝胶过滤获得三个蛋白峰,经生物活性检测,证明洗脱I峰液生物活性最大。将冼脱I峰液再经PM10超滤膜浓缩收集浓缩蛋白液,分别用THK24、TTK24微型过滤器去除大于100KDa和小于30KDa蛋白,过分子筛高效液相色谱柱。
结果:得到4个主要蛋白峰,前三峰蛋白分子量均超过150KDa,第四峰分子量为67KDa,经SDS-PAGE和银染色法进一步证实该蛋白分子量为67KDa,基本为单一蛋白带。
结论:Sephadex凝胶过滤、多次超滤和分子筛高效液相色谱技术综合应用是纯化雪旺细胞源神经营养蛋白较好的方法。