【摘 要】
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【目的】在乳酸菌中表达猪源A组轮状病毒重组质粒pW425et-Vp7,并检测其抗原性,为进一步制备猪轮状病毒乳酸菌疫苗奠定基础。【方法】摸索电转化条件,将已构建的重组质粒pW425
【基金项目】
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国家“863计划”(2003AA24112002、2006AA10A205,2007AA10Z322);国家自然科学基金(0200199、30671573);吉林省科技厅项目(20020220)~~
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【目的】在乳酸菌中表达猪源A组轮状病毒重组质粒pW425et-Vp7,并检测其抗原性,为进一步制备猪轮状病毒乳酸菌疫苗奠定基础。【方法】摸索电转化条件,将已构建的重组质粒pW425et-Vp7转化至thyA基因缺陷型的嗜酸乳杆菌中。筛选阳性克隆,采用SDS-PAGE和Western blot检测其表达情况。并将BALB/c小鼠口服免疫该重组菌,间接ELISA检测其免疫原性。另外,给免疫后小鼠攻以纯化的猪轮状病毒(蛋白含量15mg/mL),初步检测该重组菌的免疫保护作用。【结果】Vp7基因在乳酸菌中获得表达,大小约40.77kDa,且该蛋白可与猪轮状病毒抗体反应,具有反应原性。ELISA检测小鼠肠黏膜样品结果显示免疫后小鼠能产生明显的抗轮状病毒SIgA抗体,表明该重组菌具有较好的免疫原性。且攻毒后,免疫组仅23%的小鼠发生腹泻,初步证明该重组菌对猪轮状病毒的攻击具有较好的保护作用。【结论】在乳酸菌中成功地表达了猪轮状病毒Vp7基因,制备了猪轮状病毒Vp7重组乳酸菌,该重组菌具有较好的抗原性,初步证明其作为疫苗的可行性。
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中图分类号：R54；R443+.8 文献标识码：A 文章编号：1009_816X(2011) 05_0356_03 DOI:10.3969/j.issn.1009_816X.2011.05.09 Clinical Diagnostic Value of Auditory Event Related Potentials on Ear ly Stage Vascular Cognitive