论文部分内容阅读
利用PCR技术从少根根霉中扩增出脂肪酶基因（包括前导序列和成熟肽），并将其连接到酵母分泌表达载体pPIC9K中，转化毕赤酵母GS115。利用抗生素G418从重组阳性克隆中筛选得到高拷贝的转化子。在5L的发酵罐中，当碳源耗尽后开始流加甲醇诱导脂肪酶的表达，经过96h培养后发酵液上清液中重组脂肪酶（rRAL）的表达量约为90mg／L。rRAL经过超滤，SP-Sepharose离子交换层析和Bull-Sepharose疏水层析纯化。纯化后的蛋白在SDSPAGE上为单一条带，表观分子量为32kDa，比酶活为154