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植物油脂经过加工后,天然存在的抗氧化成分会大量损失。为保证油脂的质量安全,防止油脂在贮存过程中发生氧化酸败,在油脂中添加合成抗氧化剂是最有效的解决方法之一。按来源不同,抗氧化剂主要分为天然和人工合成抗氧化剂,为了节约成本,企业一般会使用人工合成抗氧化剂,以延长食品的保质期。食品中的合成抗氧化剂主要有丁基羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)、没食子酸丙酯(PG)等。目前抗氧化剂的检测方法主要有比色法、气相色谱法、液相色谱法、电化学分析法、气质联用法、液质联用法等。GB/T 5009.32-2017食品中9种抗氧化剂的测定,规定了相关技术方法的检测范围,本研究利用超高效液相色谱对该方法进行了优化,缩短了分析时间,简化了处理过程,且有更高的灵敏度、更低的定量限。
一、材料与方法
1.仪器、试剂与标准品。(1)仪器。LC30A超高效液相色谱仪(日本岛津公司); D型干式氮吹仪(上海沪析实业有限公司);MS3涡旋震荡器(德国IKA公司);Allegra 64R低温高速离心机 (美国贝克曼公司);ME204电子天平(瑞士梅特勒公司)。(2)试剂与标准品。试剂: 乙腈、正己烷(HPLC级, 美国天地)、甲酸(HPLC级, 阿拉丁)。标准品:乙腈中9种抗氧化剂混标(GB 5009.32-2016,编号为80861JH,北京坛墨质检)。
2.实验方法。(1)标准溶液的制备。混合标准溶液:准确称取1000μg/mL混合標准溶液2.5mL,用乙腈稀释定容至25mL,配置成浓度为100μg/mL的混合标准储备液。分别取0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mL储备液,用乙腈稀释定容至10mL,配置成浓度为5.0、10.0、20.0、50.0、100.0μg/mL系列混合标准工作液。
(2)样品处理。称取约1.00g样品于50mL离心管中,加入5mL乙腈饱和的正己烷溶液,涡旋2min,再加入5mL正己烷饱和的乙腈溶液涡旋提取2min,8000r/min离心5分钟,去除正己烷层,吸取乙腈层2.00mL,40℃氮气吹干,加入0.5mL30%乙腈水溶液,涡旋1min,溶液过0.22μm尼龙滤膜,液相色谱测定。
3.色谱条件。色谱柱:Shim-pack XR-ODS III(2mmL×75mm,1.6μm);流速:0.5mL/min;进样量5μL,柱温40℃;流动相A:0.1%甲酸乙腈溶液;流动相B:0.1%甲酸水溶液;洗脱程序(A)0-1.5min,30%升至40%;1.5-6.5min,升至42%;6.5-7.5min保持90%;检测波长:280nm;检测器采集频率:100ms;外标法定量。
二、结果与分析
1.标准谱图。本文采用超高效液相色谱法测定9种合成抗氧化剂,紫外检测器检测频率为100ms,色谱图如图1所示。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/zgsp/zgsp202111/zgsp20211133-1-l.jpg)
2.标准曲线及定量限。依次测定浓度为5、10、20、50、100mg/L混合标准系列工作溶液,得到线性回归方程,线性关系良好。以10μg/mL浓度的混标标准品溶液进行液相分析,以各目标峰的信噪比(S/N≥10)分别确认9种抗氧化剂的定量限,如表1表示。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/zgsp/zgsp202111/zgsp20211133-2-l.jpg)
3.准确度和精密度。选择空白样品测定6次,计算目标物含量后,准确添加9种抗氧化剂,质量浓度均为5、50mg/kg,按确定的方法进行处理(n=6),计算加标回收率和精密度,见表2。
本研究基于超高效液相色谱法建立了一种处理简单、快速、准确定量分析食用油中没食子酸丙酯、2,4,5-三羟基苯丁酮、叔丁基对苯二酚、去甲二氢愈创木酸、叔丁基对羟基茴香醚BHA、2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚、没食子酸辛酯、2,6-二叔丁基对甲基苯酚、没食子酸十二酯等9种抗氧化剂的方法,与GB 5009.32-2016中第一法相比,简化了净化过程,提高了检测灵敏度,缩短了检测分析时间,节省了试剂用量。
结果显示,本方法可以在11min内完成9种化合物的检测,具有良好的精确度和准确度,在5.0-50μg/mL范围内,信号响应值呈现良好的线性关系,线性相关系数大于0.999,定量为0.3-2.4μg/kg,加标回收率为89.6%-96.1%,相对标准偏差在1.3%-7.0%。(基金项目:2020年杨凌职业技术学院校内基金项目“食品中多种抗氧化剂的快速检测研究”,编号ZK20-61。)
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作者简介:崔利辉(1987-),男,汉族,陕西杨凌,杨凌职业技术学院生物工程分院,硕士研究生,助教;研究方向:食品质量安全检测。
一、材料与方法
1.仪器、试剂与标准品。(1)仪器。LC30A超高效液相色谱仪(日本岛津公司); D型干式氮吹仪(上海沪析实业有限公司);MS3涡旋震荡器(德国IKA公司);Allegra 64R低温高速离心机 (美国贝克曼公司);ME204电子天平(瑞士梅特勒公司)。(2)试剂与标准品。试剂: 乙腈、正己烷(HPLC级, 美国天地)、甲酸(HPLC级, 阿拉丁)。标准品:乙腈中9种抗氧化剂混标(GB 5009.32-2016,编号为80861JH,北京坛墨质检)。
2.实验方法。(1)标准溶液的制备。混合标准溶液:准确称取1000μg/mL混合標准溶液2.5mL,用乙腈稀释定容至25mL,配置成浓度为100μg/mL的混合标准储备液。分别取0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mL储备液,用乙腈稀释定容至10mL,配置成浓度为5.0、10.0、20.0、50.0、100.0μg/mL系列混合标准工作液。
(2)样品处理。称取约1.00g样品于50mL离心管中,加入5mL乙腈饱和的正己烷溶液,涡旋2min,再加入5mL正己烷饱和的乙腈溶液涡旋提取2min,8000r/min离心5分钟,去除正己烷层,吸取乙腈层2.00mL,40℃氮气吹干,加入0.5mL30%乙腈水溶液,涡旋1min,溶液过0.22μm尼龙滤膜,液相色谱测定。
3.色谱条件。色谱柱:Shim-pack XR-ODS III(2mmL×75mm,1.6μm);流速:0.5mL/min;进样量5μL,柱温40℃;流动相A:0.1%甲酸乙腈溶液;流动相B:0.1%甲酸水溶液;洗脱程序(A)0-1.5min,30%升至40%;1.5-6.5min,升至42%;6.5-7.5min保持90%;检测波长:280nm;检测器采集频率:100ms;外标法定量。
二、结果与分析
1.标准谱图。本文采用超高效液相色谱法测定9种合成抗氧化剂,紫外检测器检测频率为100ms,色谱图如图1所示。
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2.标准曲线及定量限。依次测定浓度为5、10、20、50、100mg/L混合标准系列工作溶液,得到线性回归方程,线性关系良好。以10μg/mL浓度的混标标准品溶液进行液相分析,以各目标峰的信噪比(S/N≥10)分别确认9种抗氧化剂的定量限,如表1表示。
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3.准确度和精密度。选择空白样品测定6次,计算目标物含量后,准确添加9种抗氧化剂,质量浓度均为5、50mg/kg,按确定的方法进行处理(n=6),计算加标回收率和精密度,见表2。
本研究基于超高效液相色谱法建立了一种处理简单、快速、准确定量分析食用油中没食子酸丙酯、2,4,5-三羟基苯丁酮、叔丁基对苯二酚、去甲二氢愈创木酸、叔丁基对羟基茴香醚BHA、2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚、没食子酸辛酯、2,6-二叔丁基对甲基苯酚、没食子酸十二酯等9种抗氧化剂的方法,与GB 5009.32-2016中第一法相比,简化了净化过程,提高了检测灵敏度,缩短了检测分析时间,节省了试剂用量。
结果显示,本方法可以在11min内完成9种化合物的检测,具有良好的精确度和准确度,在5.0-50μg/mL范围内,信号响应值呈现良好的线性关系,线性相关系数大于0.999,定量为0.3-2.4μg/kg,加标回收率为89.6%-96.1%,相对标准偏差在1.3%-7.0%。(基金项目:2020年杨凌职业技术学院校内基金项目“食品中多种抗氧化剂的快速检测研究”,编号ZK20-61。)
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作者简介:崔利辉(1987-),男,汉族,陕西杨凌,杨凌职业技术学院生物工程分院,硕士研究生,助教;研究方向:食品质量安全检测。