目的 观察细胞外信号调节激酶(ERK)信号传导通路在乙肝病毒X基因(HBx)改变肝癌细胞HepG2对顺铂敏感性中的作用.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法从pCP10质粒中扩增482 bp HBx的开放读码框(ORF),构建表达载体pcDNA3-HBx并进行酶切及测序鉴定.应用脂质体将其转染HepG2,50 mg/L G418筛选阳性克隆,抽提mRNA,逆转录(RT)-PCR鉴定是否稳定表达HBx.Western blot法检测转染前后44×103及42×103磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达.噻唑蓝(MTT)法检测转染空脂质体组、空载体组HepG2、HBx+ HepG2对2 mg/L顺铂敏感性的差异,以及顺铂联合ERK通路特异性抑制剂PD98059对HBx+HepG2抑制率的改变.结果 从pCP10中扩增得到482 bp HBx-ORF片段.将其与pcDNA3连接后经酶切及测序鉴定,成功构建HBx-ORF表达载体.从G418抗性细胞克隆中成功扩增出482 bp HBx-ORF,表明转染后的HepG2细胞稳定表达目的片段.经Western blot及灰度扫描鉴定,HBx+细胞中p-ERK蛋白表达是空脂质体组的1.97倍,是空载体组的1.67倍.MTT法检测2 mg/L顺铂作用24 h,对HBx+ HepG2的抑制率为19.56％,明显低于对空脂质体组和空载体组HepG2的抑制率(35.21％和30.18％).而先以100 μmol/L PD98059孵育2h的HBx+ HepG2,顺铂对其抑制率上升至31.20％,与未加PD98059时比较有显著提高(P＜0.05).结论 ERK信号传导通路的激活在抑制HBx+的肝癌细胞的化疗敏感性方面起重要作用,对该通路的特异性抑制有助于提高HBx+肝癌的化疗效果。
细胞外信号调节激酶通路在乙肝病毒X基因改变肝癌细胞化疗敏感性中的作用
【摘 要】
：
目的 观察细胞外信号调节激酶(ERK)信号传导通路在乙肝病毒X基因(HBx)改变肝癌细胞HepG2对顺铂敏感性中的作用.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法从pCP10质粒中扩增482 bp HBx的开放读码框(ORF),构建表达载体pcDNA3-HBx并进行酶切及测序鉴定.应用脂质体将其转染HepG2,50 mg/L G418筛选阳性克隆,抽提mRNA,逆转录(RT)-PCR鉴定是否稳定表达HBx
【机 构】
：
450003郑州,河南省人民医院疼痛科,450003郑州,河南省人民医院血液病研究所,450003郑州,河南省人民医院血液病研究所,450003郑州,河南省人民医院疼痛科,450003郑州,河南省人民
【出 处】
：
中华实验外科杂志
【发表日期】
：
2013年30期
论文部分内容阅读
其他文献
目的 探讨逆行灌注心脏不停跳治疗重度主动脉瓣狭窄(AS)并左室肥厚心肌保护及临床效果.方法 重度AS并左室肥厚46例,分别采用不停跳和停跳手术,主要检测肌钙蛋白Ⅰ(Tropnin Ⅰ)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)浓度及心肌丙二醛(MDA)含量.结果 两组比较,Tropnin Ⅰ浓度(μg/L)在主动脉开放15 min后4个时点,0.56±0.12比0.98±0.25、0
目的 构建pSilencer 3.1-细胞周期检测点激酶1(Chk1)小干扰RNA(siRNA)重组载体,观察其对顺铂抑制食管癌EC9706细胞增殖及诱导其凋亡的影响.方法 根据Chk1基因序列,设计合成3条Chk1 siRNA片段,构建3个pSilencer 3.1-Chk1 siRNA重组载体,转染人食管鳞癌EC9706,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞中Chk1
目的 检测乏氧诱导因子(HIF)-1α在胃癌组织、胃癌细胞株中的表达,探讨其对人胃癌细胞多药耐药性影响的机制.方法 Western blot检测胃癌组织、癌旁组织及胃癌细胞株中HIF-1 α表达;合成针对HIF-1α的siRNA,并转染胃癌细胞株OCUM-2MD3;噻唑蓝(MTT)比色法检测化疗药物对转染前后胃癌细胞的抑制率;荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测转染前后胃癌细胞多药耐药因子多药耐
目的 观察在拉伸应力作用下,细胞骨架(CSK)破坏剂和膜离子通道阻滞剂对体外培养兔膝关节软骨细胞代谢的影响.方法 2月龄新西兰大白兔10只,无菌条件下剖取双膝,并将其消化为软骨细胞,并随机分为8组,即对照组,微管、微丝、中间纤维破坏组,Na+、K+、Ca2+、Cl-通道阻滞组.在拉伸应力作用下干预3d后,苏木素-伊红(HE)染色观察其形态.采用酶联免疫吸附试验(ELASA)和阿尔新蓝染色检测各组标
急性放射性肠炎是腹盆腔部肿瘤放射治疗后引起的小肠和结肠损伤,可导致肠腺细胞再生受阻,绒毛破坏,导致毒血症,后果严重,临床治疗棘手[1].我们使用放射诱导的大鼠肠损伤模型,观察凉血愈肠汤对于肠上皮细胞增殖的影响.一、材料和方法1.材料:体质量220 ～ 250 g的雄性SD大鼠购于北京华阜康生物科技公司.凉血愈肠汤来自第二炮兵总医院中药房,超敏链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)试剂盒购自福州迈新
期刊
目的 观察RNA干扰沉默B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1(Bmi-1)基因对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 PC-3细胞随机分为3组,分别转染Bmi-1靶序列干扰RNA (Bmi-1-siRNA)、无义对照siRNA、空白脂质体.48 h后收集细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测Bmi-1 mRNA和蛋白表达水平.96孔板噻唑蓝(MTT)法检测
目的 观察肝癌细胞株HepG2自身分泌的白细胞介素-6(IL-6)对其增殖能力和细胞周期的影响.方法 RNA干扰技术沉默IL-6基因,同时设空白对照组(不加转染试剂)、正常对照组(转染空脂质体)、无义对照组[转染无义对照小干扰RNA(siRNA)],实验对照组(转染沉默IL-6的siRNA).噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖能力,用流式细胞技术检测细胞的生长周期.结果 逆转录-聚合酶链反应(R
目的 探讨男性解脲支原体(UU)感染对精子质量的影响.方法 随机选取83例UU阳性的不育症患者,比较治疗前与治愈后的精液质量、正常精子形态率的差异.结果 治愈后的精液液化时间为(33.37±14.25) min、精子密度为(77.38±66.19)×106/ml、成活率为(52.37±18.80)％、活力为(39.39±16.00)％,均有所改善,但差异无统计学意义(P＞0.05);治愈后的精子形
目的 应用血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)腹腔注射建立小鼠主动脉夹层模型.方法 8月龄C57BL/6J小鼠40只,雌雄不拘,随机分为2组.实验组20只,每8h腹腔注射血管紧张素Ⅱ,剂量为每天4.5 mg/kg;对照组20只,每8h腹腔注射去甲肾上腺素,剂量为每天12 mg/kg.分别于注射30 min后应用鼠尾测压器检测并记录小鼠血压(收缩压).精心饲养14 d,中途死亡小鼠直接解剖,取出主动脉.14