【摘 要】
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目的：探讨天麻素对D-半乳糖诱导的BV2细胞衰老的保护作用及机制。方法：使用不同浓度（10、20、30和40μg/mL）的D-半乳糖刺激BV2细胞24 h，建立细胞衰老模型，并用CCK-8法筛选出D-半乳糖的最佳造模浓度；实验分为4组：正常组、模型组、Silent mating type information regulation 2 homolog 3（SIRT3）抑制剂+天麻素组和天麻素组；
【基金项目】
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国家自然科学基金（31671139）； 烟台市重点研发计划项目（2017ZH051）；
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目的：探讨天麻素对D-半乳糖诱导的BV2细胞衰老的保护作用及机制。方法：使用不同浓度（10、20、30和40μg/mL）的D-半乳糖刺激BV2细胞24 h，建立细胞衰老模型，并用CCK-8法筛选出D-半乳糖的最佳造模浓度；实验分为4组：正常组、模型组、Silent mating type information regulation 2 homolog 3（SIRT3）抑制剂+天麻素组和天麻素组；用CCK-8法检测不同浓度（10、20、30、40和50μmol/L）的天麻素对D-半乳糖刺激的BV2细胞活力的影响，并筛选出最佳的天麻素浓度；使用β-半乳糖苷酶（Senescence β-Galactosidase,SA-β-Gal）染色检测细胞衰老面积；使用生化法检测各组细胞活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平；使用Enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）法检测各组细胞神经炎症因子IL-1β（Interleukin 1β,IL-1β）、IL-6（Interleukin 6,IL-6）和TNF-α（Tumor necrosis factor α,TNF-α）水平；使用免疫荧光法检测各组细胞SIRT3荧光强度；使用Western Blot法检测细胞SIRT3、P16和P21的蛋白表达水平。结果：30μg/mL的D-半乳糖刺激BV2细胞活力极显著降低（P＜0.01），引起BV2细胞中SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达极显著增加（P＜0.01），细胞中ROS水平和炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平极显著增高（P＜0.01），细胞内SIRT3蛋白表达极显著降低（P＜0.01）。而30μmol/L天麻素能极显著提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力（P＜0.01），并且极显著降低细胞SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达水平（P＜0.01），极显著降低ROS水平和神经炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平（P＜0.01），极显著提高细胞内SIRT3蛋白荧光强度和表达水平（P＜0.01）。结论：天麻素能够提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力，改善BV2细胞衰老染色和衰老蛋白表达，并降低ROS水平和减缓炎症反应，这可能与天麻素提高SIRT3蛋白表达有关。
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