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目的:
介绍一种视网膜全细胞膜片钳联合单细胞逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术在视网膜单细胞信号成分分析中的应用,并研究N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)对ON型双极细胞中G蛋白相关mRNA表达的影响。
方法:实验研究。3~5周龄C57BL/6J小鼠20只随机分为2组,每组各10只,分别玻璃体腔注射3 μl NMDA(30 nmol/L)构建青光眼模型,3 μl PBS(10 nmol/L)作为对照组,24 h后取视网膜,膜片钳下钳取单个ON型双极细胞,并做RT-PCR观察几种目的mRNA的表达差异。2组间各参数比较采用Mann-Whitney检验。
结果:RT-PCR结果显示蛋白激酶Cα亚基(PKCα)、瞬时感受电位离子通道1(TRPM1)、G蛋白α亚单位(Gαo)的表达在NMDA青光眼模型构建后分别为0.536 ± 0.339、0.337 ± 0.271、4.36 ± 1.83,构建前后差异有统计学意义(U=0,P=0.001;U=0,P=0.002;U= 36,P=0.002)。
结论:NMDA诱导的青光眼模型可影响视网膜ON型双极细胞G蛋白耦联通道的信号传导。