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摘 要：以南美白对虾为研究对象，研究了在饲料中添加酵母培养物（在100 g饲料中分别添加0、0.07、0.14 g）及在水体中添加枯草芽孢杆菌（添加量分别为0、0.1、0.2 g/m3）对生长性能及水质的影响。结果表明，各试验组对虾成活率存在显著性差异（P<0.05），随着芽孢杆菌添加量的增加对虾成活率呈上升趋势，养殖水体中氨氮、亚硝态氮、溶解氧水平呈下降趋势，硝态氮无明显变化并始终处于上升趋势。结果显示酵母培养物的最适添加量为每100 g南美白对虾基础饲料中0.14 g、养殖水体中枯草芽孢杆菌的适宜添加量为0.1 g/m3。
关键词：酵母培养物；枯草芽孢杆菌；南美白对虾；生长；水质
养虾过程中最怕的就是虾得病，所以做好虾病的预防非常重要。提高对虾的免疫力和改善养殖水环境，降低虾池中的氨氮、亚硝态氮等有害物质是虾病防治的重要措施。酵母培养物是一种发酵产品，主要成分为培养基、酵母菌菌体以及次级代谢产物，在饲料中添加后能够调节肠道内的微生态环境、促进养殖动物生长、增强动物免疫力[1]。芽孢杆菌为杆菌科的一属，是一类好氧的革兰氏阳性菌，能够将养殖水体中的有机质进行分解，降低养殖水体富营养化，同时将氨气、二氧化碳等转化为无害物质[2]。本试验在南美白对虾饲料中添加酵母培养物和在养殖水体中泼洒枯草芽孢杆菌，探讨其对对虾生长和对养殖水质的调节效果，筛选其最适宜添加量。
1 材料与方法
1.1 试验用虾
试验用南美白对虾虾苗来自于正大（卜蜂）公司，虾苗空运至天津后转运至唐山乐亭试验地点进行暂养，使其先适应试验养殖环境。
1.2 试验条件
试验在体积为1 m×0.5 m×0.6 m的水族箱中进行，温度控制在29 ℃、盐度28‰。
1.3 试验分组
分别于每100 g南美白对虾基础饲料中添加0、0.07、0.14 g酵母培养物；向养殖水体中添加枯草芽孢杆菌，添加量分别为0、0.1、0.2 g/m3，每隔3 d添加一次，共形成9种试验组，分别为：T1：0 g、0×1010 cfu/g（对照组）； T2：0 g、0.1×1010 cfu/g； T3：0 g、0.2×1010 cfu/g；T4：0.07 g、0×1010 cfu/g；T5：0.07 g、0.1×1010 cfu/g； T6：0.07 g、0.2×1010 cfu/g；T7：0.14 g、0×1010 cfu/g； T8：0.14 g、0.1×1010 cfu/g； T9：0.14 g，0.2×1010 cfu/g。试验共设三个平行组。
1.4 日常管理
枯草芽孢杆菌泼洒前先将其活化，活化用水由80%的淡水和20%的海水配制而成，盐度不宜过高，向菌液中加少量赤砂糖、氮源和附着基（稻糠）进行充气培养。培养24 h后，菌落总数达到上升期，使用200目筛绢将大型杂质过滤分离。
选取平均体重为0.04±0.01 g、体质健壮、活力强的虾苗饲养于水族箱内，每箱放养200尾，每箱放置一个充气气石，试验所用海水经二级砂滤和紫外线消毒。试验周期为50 d，每天投喂5次，投喂时间分别为06：00、10：00、14：00、18：00、22：00，日投饲率约为对虾体重的5%左右，将虾苗的摄食时长控制在1 h，日换水量为养殖水体的10%，各试验组换水量一致。
1.5 对虾生长测定
特定生长率（SGR）=100×（lnW末-lnW始）/T
饲料系数=饲料投喂总量（g）/对虾体重增加量（g）
成活率（%）= N末/N始×100
其中W末（g）、W始（g）分别代表对虾最终平均重和初始平均重；N末、N始分别代表试验结束和开始时的对虾苗数量；T为养殖天数。
1.6 水质测定
样品分析测试温度、盐度、pH（pH计法）、溶解氧（碘量法）、氨氮（靛酚蓝分光光度法）、亚硝态氮（萘乙二胺分光光度法）、硝态氮（紫外分光光度法）。操作步骤按照《海洋监测规范》（GB 17378.4-2007）、《海洋调查规范》（GB 12763-2007） 的要求执行。
1.7 数据统计与分析
试验数据采用（平均数±标准差）的方法进行表示，用 SPSS17.0 进行单因素方差分析，并结合Duncan 氏法进行多重分析比较，差异显著水平为P<0.05。
2 结果与分析
2.1 酵母培养物及枯草芽孢杆菌对南美白对虾生长性能的影响
由表1所示，随着饲料中酵母培养物添加量的增加，对照组与T2、T3试验组特定生长率均有所上升，无显著性差异（P>0.05），与其他试验组比较存在显著性差异（P<0.05）。水体中添加枯草芽孢杆菌对对虾的生长性能影响很小，各组之间无显著性差异（P>0.05）。在饲料系数方面以对照组，T2组、T3组的饲料系数最高，T7与T9组最低，T7与T9之间饲料系数无显著性差异（P<0.05），其他各组之间比较存在显著性差异（P<0.05）。对照组成活率最低、T5、T2组与各試验组存在显著性差异（P<0.05），水体中枯草芽孢杆菌浓度增加南美白对虾的成活率呈上升趋势，有显著性差异（P<0.05）。
2.2 酵母培养物及枯草芽孢杆菌对水质的影响
2.2.1 对温度、盐度、溶解氧、pH的影响 由表2所示，温度和盐度在整个试验期间变化较小，经过比较各组之间无显著性差异。对照组与T2试验组的溶氧量显著高于其他各试验组且存在显著性差异（P<0.05），T3、T4、T5、T6试验组之间无显著性差异，与T7、T8、T9试验组之间进行比较存在显著性差异（P<0.05）。整个养殖过程中随着添加微生态制剂浓度的增加pH下降明显，对照组与T2、T3、T4组之间无显著性差异（P>0.05），T5试验组同各试验组间均有显著性差异，对照组与T2组之间无显著性差异（P>0.05），T6、T7、T8、T9组之间无显著性差异（P<0.05 ）。 2.2.2 对氨氮的影响 由图1可知，各组氨氮浓度上升幅度有所差异。在养殖到第10 d时，所有组别的氨氮含量均低于0.4 mg/L，T6组的上升幅度最小，在第10 d时达到0.11 mg/L，T1与T4组的上升幅度最大。在之后的养殖试验过程中T6组均显著低于其他各试验组，养殖到第50 d时，T3与T9组的氨氮含量显著低于其他各组（P<0.05），T4组的氨氮含量达到最高1.13 mg/L，T3、T9组与其他各组之间存在显著性差异（P<0.05）。
2.2.3 对亚硝态氮的影响 由图2可知，养殖过程中第10 d时各试验组水体亚硝态氮的含量均高于0.05 mg/L。在之后的养殖过程中，T1组亚硝态氮含量均显著高于其他各组（P<0.05），各组之间的差异性不显著（P>0.05），当养殖到第40 d时，各试验组的亚硝态氮含量达到顶峰，之后开始出现不同程度的下降趋势，试验结束时对照组与各试验组的亚硝态氮含量具有显著性差异（P<0.05）。
2.2.4 對硝态氮的影响 由图3可知，各试验组水体中的硝态氮含量在养殖前20 d一直比较稳定，在养殖20 d之后硝态氮整体呈快速上升趋势，上升过程中各组无显著性差异（P>0.05）。
3 讨论
3.1 酵母培养物及枯草芽孢杆菌对南美白对虾生长性能的影响
试验结果表明，在对虾生长方面添加酵母培养物的试验组较对照组增重率有所上升但无显著性差异（P>0.05），但是在提高南美白对虾成活率，降低饲料系数的方面具有明显作用。在水体中加入枯草芽孢杆菌对于南美白对虾的生长性能影响不显著，各组之间也无显著性差异（P>0.05），但能显著提高对虾成活率和降低饲料系数。刘哲，魏时来等[3]试验证明，在饲料中添加0.5%的“XP”（一种纯正的酵母培养物）对建鲤的生长有明显的促进作用，其特定生长率比对照组提高了26.83%，饲料系数降低了22.54%。本试验结果与刘哲，魏时来等和周淑芹等在饲料中单独添加酵母培养物后得出酵母培养物具有提高生长性能、降低饲料系数、提高蛋白质利用率的结果有类似性[4]。分析其原因，酵母培养物中主要成分为葡聚糖及甘露寡糖，在南美白对虾养殖过程中，通过向饲料中添加酵母培养物可以增加对虾肠道内有益菌的数量，从而抑制肠道内弧菌的繁殖。本研究结果表明，在南美白对虾饲料中添加酵母培养物能在一定程度上促进有益菌的繁殖、减少肠道弧菌繁殖、降低饲料系数，从而起到调节肠道菌群平衡的作用。
3.2 酵母培养物及枯草芽孢杆菌对水质的影响
试验结果表明，在养殖水体中添加枯草芽孢杆菌后发现水体中亚硝态氮，氨氮的量呈下降趋势，与对照组比较存在显著性差异（P<0.05）。添加枯草芽孢杆菌的试验组与未添加枯草芽孢杆菌的对照组相比，饲料系数显著降低，分析原因可能是枯草芽孢杆菌能够利用水体中的残饵粪便生成的絮团类物质被南美白对虾摄食所致。张庆等向罗非鱼养殖水体中添加枯草芽孢杆菌后能有效控制养殖水体中的氨氮与亚硝态氮，对罗非鱼的生长性能也有一定的促进作用[5]。富丽静等[6]在高密度鲫鱼池塘中加入以枯草芽孢杆菌为主的微生物制剂进行水环境调控，发现试验池的氨氮明显低于对照池。本试验结果与朱学芝[7]和朱忠琴[8]等的研究观点相一致。
4 结论
在100 g南美白对虾基础饲料中添加0.14 g酵母培养物，在养殖水体中按0.1 g/m3的量添加枯草芽孢杆菌，对南美白对虾的生长性能具有显著的促进作用，对水中的氨氮、亚硝态氮有明显的改善作用。
参考文献：
[1] 郁欢欢，周文豪，曾虹，等.酵母培养物在水产动物中的应用及作用机理研究进展[J].饲料工业，2015（18）.
[2] 李明，双宝，李海涛，等.枯草芽孢杆菌的研究与应用[J].东北农业大学学报，2009，40（9）：111-114.
[3] 刘哲，魏时来，汪晓娟等.饲料中添加“XP”对建鲤促生长作用的研究[J].淡水渔业，2003，33（3）：27-28.
[4] 周淑芹，孙文志.酵母培养物[J].中国饲料，2003（5）：31-32.
[5] 张庆，李卓佳，陈康德.复合微生物对养殖水体生态因子的影响[J].上海海洋大学学报，1999（1）：43-47.
[6] 富丽静，王雷，宋文华.复合微生物在高密度主养鲫池塘中的应用[J].水产科学，2002， 21（1）：23-25.
[7] 朱学芝，郑石轩，潘庆军，陆秉招.微生态制剂对凡纳滨对虾生长及水质的影响[J].中山大学学报，2008，7（47卷）：58-62.
[8] 朱忠琴，王笃彩，李士虎.复合微生态制剂对虾池水体环境的影响研究[J].生物技术与育种，2005，13：29-31.
关键词：酵母培养物；枯草芽孢杆菌；南美白对虾；生长；水质
养虾过程中最怕的就是虾得病，所以做好虾病的预防非常重要。提高对虾的免疫力和改善养殖水环境，降低虾池中的氨氮、亚硝态氮等有害物质是虾病防治的重要措施。酵母培养物是一种发酵产品，主要成分为培养基、酵母菌菌体以及次级代谢产物，在饲料中添加后能够调节肠道内的微生态环境、促进养殖动物生长、增强动物免疫力[1]。芽孢杆菌为杆菌科的一属，是一类好氧的革兰氏阳性菌，能够将养殖水体中的有机质进行分解，降低养殖水体富营养化，同时将氨气、二氧化碳等转化为无害物质[2]。本试验在南美白对虾饲料中添加酵母培养物和在养殖水体中泼洒枯草芽孢杆菌，探讨其对对虾生长和对养殖水质的调节效果，筛选其最适宜添加量。
1 材料与方法
1.1 试验用虾
试验用南美白对虾虾苗来自于正大（卜蜂）公司，虾苗空运至天津后转运至唐山乐亭试验地点进行暂养，使其先适应试验养殖环境。
1.2 试验条件
试验在体积为1 m×0.5 m×0.6 m的水族箱中进行，温度控制在29 ℃、盐度28‰。
1.3 试验分组
分别于每100 g南美白对虾基础饲料中添加0、0.07、0.14 g酵母培养物；向养殖水体中添加枯草芽孢杆菌，添加量分别为0、0.1、0.2 g/m3，每隔3 d添加一次，共形成9种试验组，分别为：T1：0 g、0×1010 cfu/g（对照组）； T2：0 g、0.1×1010 cfu/g； T3：0 g、0.2×1010 cfu/g；T4：0.07 g、0×1010 cfu/g；T5：0.07 g、0.1×1010 cfu/g； T6：0.07 g、0.2×1010 cfu/g；T7：0.14 g、0×1010 cfu/g； T8：0.14 g、0.1×1010 cfu/g； T9：0.14 g，0.2×1010 cfu/g。试验共设三个平行组。
1.4 日常管理
枯草芽孢杆菌泼洒前先将其活化，活化用水由80%的淡水和20%的海水配制而成，盐度不宜过高，向菌液中加少量赤砂糖、氮源和附着基（稻糠）进行充气培养。培养24 h后，菌落总数达到上升期，使用200目筛绢将大型杂质过滤分离。
选取平均体重为0.04±0.01 g、体质健壮、活力强的虾苗饲养于水族箱内，每箱放养200尾，每箱放置一个充气气石，试验所用海水经二级砂滤和紫外线消毒。试验周期为50 d，每天投喂5次，投喂时间分别为06：00、10：00、14：00、18：00、22：00，日投饲率约为对虾体重的5%左右，将虾苗的摄食时长控制在1 h，日换水量为养殖水体的10%，各试验组换水量一致。
1.5 对虾生长测定
特定生长率（SGR）=100×（lnW末-lnW始）/T
饲料系数=饲料投喂总量（g）/对虾体重增加量（g）
成活率（%）= N末/N始×100
其中W末（g）、W始（g）分别代表对虾最终平均重和初始平均重；N末、N始分别代表试验结束和开始时的对虾苗数量；T为养殖天数。
1.6 水质测定
样品分析测试温度、盐度、pH（pH计法）、溶解氧（碘量法）、氨氮（靛酚蓝分光光度法）、亚硝态氮（萘乙二胺分光光度法）、硝态氮（紫外分光光度法）。操作步骤按照《海洋监测规范》（GB 17378.4-2007）、《海洋调查规范》（GB 12763-2007） 的要求执行。
1.7 数据统计与分析
试验数据采用（平均数±标准差）的方法进行表示，用 SPSS17.0 进行单因素方差分析，并结合Duncan 氏法进行多重分析比较，差异显著水平为P<0.05。
2 结果与分析
2.1 酵母培养物及枯草芽孢杆菌对南美白对虾生长性能的影响
由表1所示，随着饲料中酵母培养物添加量的增加，对照组与T2、T3试验组特定生长率均有所上升，无显著性差异（P>0.05），与其他试验组比较存在显著性差异（P<0.05）。水体中添加枯草芽孢杆菌对对虾的生长性能影响很小，各组之间无显著性差异（P>0.05）。在饲料系数方面以对照组，T2组、T3组的饲料系数最高，T7与T9组最低，T7与T9之间饲料系数无显著性差异（P<0.05），其他各组之间比较存在显著性差异（P<0.05）。对照组成活率最低、T5、T2组与各試验组存在显著性差异（P<0.05），水体中枯草芽孢杆菌浓度增加南美白对虾的成活率呈上升趋势，有显著性差异（P<0.05）。
2.2 酵母培养物及枯草芽孢杆菌对水质的影响
2.2.1 对温度、盐度、溶解氧、pH的影响 由表2所示，温度和盐度在整个试验期间变化较小，经过比较各组之间无显著性差异。对照组与T2试验组的溶氧量显著高于其他各试验组且存在显著性差异（P<0.05），T3、T4、T5、T6试验组之间无显著性差异，与T7、T8、T9试验组之间进行比较存在显著性差异（P<0.05）。整个养殖过程中随着添加微生态制剂浓度的增加pH下降明显，对照组与T2、T3、T4组之间无显著性差异（P>0.05），T5试验组同各试验组间均有显著性差异，对照组与T2组之间无显著性差异（P>0.05），T6、T7、T8、T9组之间无显著性差异（P<0.05 ）。 2.2.2 对氨氮的影响 由图1可知，各组氨氮浓度上升幅度有所差异。在养殖到第10 d时，所有组别的氨氮含量均低于0.4 mg/L，T6组的上升幅度最小，在第10 d时达到0.11 mg/L，T1与T4组的上升幅度最大。在之后的养殖试验过程中T6组均显著低于其他各试验组，养殖到第50 d时，T3与T9组的氨氮含量显著低于其他各组（P<0.05），T4组的氨氮含量达到最高1.13 mg/L，T3、T9组与其他各组之间存在显著性差异（P<0.05）。
2.2.3 对亚硝态氮的影响 由图2可知，养殖过程中第10 d时各试验组水体亚硝态氮的含量均高于0.05 mg/L。在之后的养殖过程中，T1组亚硝态氮含量均显著高于其他各组（P<0.05），各组之间的差异性不显著（P>0.05），当养殖到第40 d时，各试验组的亚硝态氮含量达到顶峰，之后开始出现不同程度的下降趋势，试验结束时对照组与各试验组的亚硝态氮含量具有显著性差异（P<0.05）。
2.2.4 對硝态氮的影响 由图3可知，各试验组水体中的硝态氮含量在养殖前20 d一直比较稳定，在养殖20 d之后硝态氮整体呈快速上升趋势，上升过程中各组无显著性差异（P>0.05）。
3 讨论
3.1 酵母培养物及枯草芽孢杆菌对南美白对虾生长性能的影响
试验结果表明，在对虾生长方面添加酵母培养物的试验组较对照组增重率有所上升但无显著性差异（P>0.05），但是在提高南美白对虾成活率，降低饲料系数的方面具有明显作用。在水体中加入枯草芽孢杆菌对于南美白对虾的生长性能影响不显著，各组之间也无显著性差异（P>0.05），但能显著提高对虾成活率和降低饲料系数。刘哲，魏时来等[3]试验证明，在饲料中添加0.5%的“XP”（一种纯正的酵母培养物）对建鲤的生长有明显的促进作用，其特定生长率比对照组提高了26.83%，饲料系数降低了22.54%。本试验结果与刘哲，魏时来等和周淑芹等在饲料中单独添加酵母培养物后得出酵母培养物具有提高生长性能、降低饲料系数、提高蛋白质利用率的结果有类似性[4]。分析其原因，酵母培养物中主要成分为葡聚糖及甘露寡糖，在南美白对虾养殖过程中，通过向饲料中添加酵母培养物可以增加对虾肠道内有益菌的数量，从而抑制肠道内弧菌的繁殖。本研究结果表明，在南美白对虾饲料中添加酵母培养物能在一定程度上促进有益菌的繁殖、减少肠道弧菌繁殖、降低饲料系数，从而起到调节肠道菌群平衡的作用。
3.2 酵母培养物及枯草芽孢杆菌对水质的影响
试验结果表明，在养殖水体中添加枯草芽孢杆菌后发现水体中亚硝态氮，氨氮的量呈下降趋势，与对照组比较存在显著性差异（P<0.05）。添加枯草芽孢杆菌的试验组与未添加枯草芽孢杆菌的对照组相比，饲料系数显著降低，分析原因可能是枯草芽孢杆菌能够利用水体中的残饵粪便生成的絮团类物质被南美白对虾摄食所致。张庆等向罗非鱼养殖水体中添加枯草芽孢杆菌后能有效控制养殖水体中的氨氮与亚硝态氮，对罗非鱼的生长性能也有一定的促进作用[5]。富丽静等[6]在高密度鲫鱼池塘中加入以枯草芽孢杆菌为主的微生物制剂进行水环境调控，发现试验池的氨氮明显低于对照池。本试验结果与朱学芝[7]和朱忠琴[8]等的研究观点相一致。
4 结论
在100 g南美白对虾基础饲料中添加0.14 g酵母培养物，在养殖水体中按0.1 g/m3的量添加枯草芽孢杆菌，对南美白对虾的生长性能具有显著的促进作用，对水中的氨氮、亚硝态氮有明显的改善作用。
参考文献：
[1] 郁欢欢，周文豪，曾虹，等.酵母培养物在水产动物中的应用及作用机理研究进展[J].饲料工业，2015（18）.
[2] 李明，双宝，李海涛，等.枯草芽孢杆菌的研究与应用[J].东北农业大学学报，2009，40（9）：111-114.
[3] 刘哲，魏时来，汪晓娟等.饲料中添加“XP”对建鲤促生长作用的研究[J].淡水渔业，2003，33（3）：27-28.
[4] 周淑芹，孙文志.酵母培养物[J].中国饲料，2003（5）：31-32.
[5] 张庆，李卓佳，陈康德.复合微生物对养殖水体生态因子的影响[J].上海海洋大学学报，1999（1）：43-47.
[6] 富丽静，王雷，宋文华.复合微生物在高密度主养鲫池塘中的应用[J].水产科学，2002， 21（1）：23-25.
[7] 朱学芝，郑石轩，潘庆军，陆秉招.微生态制剂对凡纳滨对虾生长及水质的影响[J].中山大学学报，2008，7（47卷）：58-62.
[8] 朱忠琴，王笃彩，李士虎.复合微生态制剂对虾池水体环境的影响研究[J].生物技术与育种，2005，13：29-31.