【摘 要】
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为研究马立克氏病病毒(MDV) Meq蛋白的生物学功能,应用磷酸钙与MDV Meq基因重组的反转录病毒转染载体质粒RCAS-Meq的DNA,转染于鸡胚成纤维细胞系DF1.经间接免疫荧光技术研究
【机 构】
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广西大学动物科技学院,美国农业部禽病与肿瘤研究所
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为研究马立克氏病病毒(MDV) Meq蛋白的生物学功能,应用磷酸钙与MDV Meq基因重组的反转录病毒转染载体质粒RCAS-Meq的DNA,转染于鸡胚成纤维细胞系DF1.经间接免疫荧光技术研究表明,转染后第3天即开始有少量DF1细胞在细胞核表达Meq蛋白,以后阳性细胞增多,到转染后第7天阳性细胞最多,之后荧光即衰减;通过酶联免疫吸附试验检测,发现细胞培养上清中游离病毒在转染后第5天即可检出,直至第7天仍维持最高水平,第9天开始下降.用细胞培养上清感染DF1细胞单层,于感染后第2天即可检出Meq蛋白阳性细胞,之后阳性细胞逐渐增多,到第4～5天达高峰,之后逐渐衰减;培养上清中的游离病毒在感染后第4天即可被检出,第5～7天达最高值.研究结果表明:(1) 磷酸钙法能很好地将重组质粒RCAS-Meq DNA转染到DF1细胞中,而对细胞的损伤很小;(2) 转染后细胞释放出的重组病毒能感染DF1细胞并稳定地表达Meq蛋白.表明Meq基因在构建的重组病毒基因组中的存在及其转录表达都是稳定的.这为在体内和体外研究MDV Meq基因的生物学功能提供了一种非常有效的方法和途径;(3) Meq蛋白仅分布于细胞核(包括核质和核仁).这一结果证实了Meq属于转录激活因子的一种细胞核和核仁蛋白.
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