【摘 要】
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1999 年 ,VOGELSTEIN 等[1]正式提出了数字聚合酶链反应(dPCR)的概念 . 目前 ,dPCR 主要分为 3类 :微反应室/孔板数字 PCR 、微流控芯片数字 PCR和微滴式数字聚合酶链反应 (d
【机 构】
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昆明医科大学 :病原生物学与免疫学系,云南昆明 650500;昆明医科大学 :云南省高校热带传染病重点实验室,云南昆明 650500;昆明医科大学 :生物化学与分子生物学系,云南昆明 650500
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1999 年 ,VOGELSTEIN 等[1]正式提出了数字聚合酶链反应(dPCR)的概念 . 目前 ,dPCR 主要分为 3类 :微反应室/孔板数字 PCR 、微流控芯片数字 PCR和微滴式数字聚合酶链反应 (ddPCR ) [1-3] . 其中 , ddPCR 是利用微滴发生器将反应体系一次性生成单分子水平的油包水微滴 ,再独立地进行循环扩增反应 ,扩增结束后分别对每个反应单元的荧光信号进行采集 ,有荧光信号的标记为“1” ,无荧光信号的标记为“0” ,使用泊松概率分布函数进行计算 ,最终得出反应体系最初的 DNA 拷贝量 . ddPCR 与实时荧光定量PCR(qPCR)采用相同的引物及探针 ,通过有限稀释法和泊松分布原理直接定量分析 ,计算出 DNA 水平 .这种技术无须依赖标准曲线和循环阈值(Ct 值) ,并且检测下限可低至单拷贝而达到真正意义上的绝对定量 .ddPCR 已被运用于低丰度和复杂来源的病原微生物核酸检测 、肿瘤标志因子检测 、拷贝数变异分析 、microR-NA 表达分析和无创产前检测等众多领域[4-7] .
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