表达抗α毒素单链抗体基因工程菌株的构建

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将2种抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体(ScFv)基因ScFv-2E3和ScFv-1A8分别克隆至表达质粒pUC119,pET-20b,pET-28a和 pHOG21中,构建了重组质粒,分别转化至相应的受体菌JM105, BL21(DE3)和XL1-BLUE中,得到表达ScFv的重组菌株.ELISA和SDS-PAGE分析检测表明:经IPTG诱导后所表达的ScFv目的蛋白主要形成了包含体的形式,但也有少量ScFv存在于重组菌株的培养上清和胞周质中.经薄层扫描分析:重组菌株XL1-BLUE (pHOG-2E3) 的蛋白表达产物分别占菌体可溶性蛋白的 4 %,重组菌株XL1-BLUE (pHOG-2E3) 的蛋白表达产物占菌体总蛋白的相对含量为 22 %,其相对分子量约为 31 ku.表达的ScFv蛋白不但具有中和卵磷脂酶的活性,而且能够对致死性腹腔攻击α毒素的小鼠产生良好的被动保护作用.
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