甲基-β-环糊精对内皮素-1诱导大鼠颈总动脉血管平滑肌细胞胞内钙浓度变化的影响

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目的研究甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrin,MβCD)对内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导大鼠颈总动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)胞内钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法原代培养大鼠颈总动脉平滑肌细胞,通过形态学和免疫荧光染色鉴定。再通过炎症因子TNF-α(100μg/L)和MβCD(5 mmol/L)的不同处理将细胞分为4组:PSS液+ET-1组(A组)、PSS液+MβCD+ET-1组(B组)、PSS液+TNF-α+ET-1组(C组)、PSS液+TNF-α+MβCD+ET-1组(D组)。最后各组细胞经Furo-2/AM染色后,采用TILL荧光钙成像系统检测活细胞在ET-1(100 nmol/L)刺激下胞内钙荧光强度的变化情况,R(F 340 nm/F 380 nm)值代表单细胞胞内钙荧光强度比值。结果TILL荧光钙成像系统检测结果显示A~D组细胞静息状态荧光强度R0值分别为(0.591 6±0.082 0)、(0.575 3±0.079 0)、(0.655 1±0.083 7)、(0.610 5±0.080 4),组间比较无统计学差异(P>0.05)。各组细胞经ET-1(100 nmol/L)刺激后胞内钙荧光强度分别较静息状态上升:A组上升(115±17)%,B组上升(67±15)%,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05);C组上升(279±21)%,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01);D组上升(88±16)%,与C组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MβCD破坏caveolae结构后明显降低了VSMCs胞内钙离子浓度升高程度,caveolae可能是抑制脑血管痉挛发生的重要靶点。
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