【摘 要】
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为建立植物中特异性免疫沉淀微量蛋白体系,以GUS为报告基因,利用Flag、Myc两种蛋白标签对GUS氨基端进行标记,以农杆菌为介导,在烟草叶片中瞬时高效表达GUS基因.利用Western b
【机 构】
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中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083
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为建立植物中特异性免疫沉淀微量蛋白体系,以GUS为报告基因,利用Flag、Myc两种蛋白标签对GUS氨基端进行标记,以农杆菌为介导,在烟草叶片中瞬时高效表达GUS基因.利用Western blot检测叶片中标记的GUS蛋白含量,便于后续GUS蛋白的特异性纯化.以anti-FlagM2磁珠和anti-c-Myc琼脂糖为固相载体,特异性识别和结合标记的GUS蛋白,利用磁分离技术和特异性免疫沉淀对目的蛋白进行两次富集,通过Western blot检测对比各个步骤所得目的蛋白的含量判断富集纯化效果.结果表明,以磁珠和琼脂糖为载体的蛋白,经两次特异性免疫沉淀后得到明显富集和纯化,且每一次的富集效果都较好,初步建立了蛋白标签和磁珠法二次特异性免疫沉淀体系,为体外深入研究活性蛋白复合体奠定了一定的技术基础.
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