【摘 要】
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目的 构建天然人源性单链抗体（scFv）文库,并对文库质量进行鉴定。方法 采集220份未经主动免疫健康人外周血,分离单个核细胞后提取总RNA,逆转录成cDNA,混匀,以此为模板PCR扩增人
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目的 构建天然人源性单链抗体（scFv）文库,并对文库质量进行鉴定。方法 采集220份未经主动免疫健康人外周血,分离单个核细胞后提取总RNA,逆转录成cDNA,混匀,以此为模板PCR扩增人抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL,包括Vκ和Vλ）,再经过overlap-PCR法,将VH基因和VL基因随机拼接成人scFv基因文库后,插入噬菌体载体pComb3XSS中,电转化大肠杆菌XL1-Blue制备scFv文库。通过菌落数量计算库容,并随机挑选100个单菌落验证scFv基因阳性克隆率,基因测序分析scFv
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