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目的评价自制甲氨蝶呤质控血清在均相酶免疫法测定血药浓度中的应用。方法取注射用甲氨蝶呤5mg,注射用水溶解后加入血清基质液,制备浓度分别为0.44,1.10,1.54μmol/L的甲氨蝶呤质控血清,考察方法准确性、重复性、质控的稳定性以及临床应用。结果自制低、中、高浓度的甲氨蝶呤质控血清检测结果为靶值的97.7%~99.1%,方法重复性RSD小于2%,-30℃保存90天含量变化小于2%。结论自制甲氨蝶呤质控血清操作方法简单、成本低、结果准确可靠,-30℃保存90天可以作为实验室日常质控应用。