背景:近年来"无细胞"的干细胞治疗方法备受关注,但对于提取高质量外泌体的方法尚无确切定论。目的:采用3种方法提取人脐带间充质干细胞中的外泌体,筛选最佳提取外泌体的方法。方法:分别用Total Exosome Isolation试剂盒、Exo Quick试剂盒及差速超速离心法提取人脐带间充质干细胞来源的外泌体。使用透射电镜观察外泌体形态,BCA法进行蛋白质定量,western blot检测外泌体表面标志物CD9、CD81、CD63的表达。结果与结论:(1)3种方法均可以从培养基中提取到间充质干细胞来源的外泌体,并且在透射电镜下观察到圆形或椭圆形的膜性小囊泡;(2)差速超速离心法提取的外泌体中的蛋白浓度和纯度最高,Exo Quick试剂盒法其次,Total Exosome Isolation试剂盒法得到的蛋白浓度最低,且3者比较差异有显著性意义(P<0.05);(3)3种方法提取的外泌体均表达其表面特异性标志物CD81、CD63和CD9,且在含有相同蛋白浓度的情况下,差速超速离心法提取的外泌体的表面标志物含量最高,Exo Quick试剂盒法其次,Total Exosome Isolation试剂盒法提取的外泌体表面标志物含量较低;(4)差速超速离心法和Total Exosome Isolation试剂盒法的操作时间明显多于Exo Quick试剂盒法,差异有显著性意义(P<0.05);(5)结果表明,尽管差速超速离心法耗时稍长,但是纯度相对较高,满足实验的基本需求,可作为一种合理的分离方法。