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以phagemid,pBluescript为载体,把牛凝乳酶原基因的KpnI-KpnI片段插入,将牛凝乳酶45位Cys用Ala取代,根据遗传密码子的兼并性,在其附近引入限制性内切酶ClaI位点.利用寡聚核苷酸介导的定位突变技术,以获得凝乳酶Cys45Ala的突变基因.为了提高突变效率,采用Kunkel等创立的含尿嘧啶单链DNA模板法,经酶切鉴定及双脱氧末端终止法测序,证明已获得预期的突变。