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以ｐｈａｇｅｍｉｄ，ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ为载体，把牛凝乳酶原基因的ＫｐｎＩ－ＫｐｎＩ片段插入，将牛凝乳酶４５位Ｃｙｓ用Ａｌａ取代，根据遗传密码子的兼并性，在其附近引入限制性内切酶ＣｌａＩ位点．利用寡聚核苷酸介导的定位突变技术，以获得凝乳酶Ｃｙｓ４５Ａｌａ的突变基因．为了提高突变效率，采用Ｋｕｎｋｅｌ等创立的含尿嘧啶单链ＤＮＡ模板法，经酶切鉴定及双脱氧末端终止法测序，证明已获得预期的突变。