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为了建立新城疫病毒(NDV)耐热弱毒株的反向遗传操作平台,以NDV TS09-C耐热弱毒株为研究对象,构建了TS09-C株的全长cDNA克隆质粒和3个分别表达NP、P和L的辅助质粒.通过4个质粒共转染预感染有表达T7 RNA聚合酶的痘病毒的BHK-21细胞,拯救出了重组病毒rTS09-C株.生物学特性试验结果表明,重组病毒rTS09-C株具有与亲本株相似的耐热、弱毒和细胞增殖特性.NDV耐热毒株反向遗传操作系统的建立为耐热活疫苗载体的研究,进一步研发新型多联(多价)耐热禽用活疫苗提供了技术平台,也为耐热机理的研究打下基础.