【摘 要】
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目的 构建鼠伤寒沙门菌ydiU基因敲除株,并比较敲除株与野生株在不同生存压力条件培养基中的生长曲线,为进一步研究ydiU基因及其编码蛋白YdiU的功能奠定基础. 方法 以鼠伤寒沙
【机 构】
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山东中医药大学,山东济南,250355;山东省职业卫生与职业病防治研究院;山东省医学科学院基础医学研究所;山东中医药大学,山东济南250355
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目的 构建鼠伤寒沙门菌ydiU基因敲除株,并比较敲除株与野生株在不同生存压力条件培养基中的生长曲线,为进一步研究ydiU基因及其编码蛋白YdiU的功能奠定基础. 方法 以鼠伤寒沙门菌ATCC14028株作为母本PCR扩增含有ydiU基因上下游同源臂和氯霉素抗性片段的线性打靶基因,通过同源重组操作得到ydiU基因敲除株ATCC14028△ydiU.分别测定敲除株与与野生株在营养限制、氧化应激、缺铁、高盐,高糖、低PH和吲哚等压力培养基中的生长曲线,并对两株细菌的生长特性进行比较. 结果 经PCR内、外侧鉴定及测序鉴定表明ydiU基因敲除株构建成功.敲除株和野生株在LB培养基中培养6h即对数生长期后期时平均A600值分别为0.805和0.894,而在培养时间9h即平台期前期时检测平均值分别为1.022和1.220.两个生长关键期的细菌生长速度均表现为敲除株略为缓慢,但两株菌最终在平台期后期达到相同A值.在限制营养培养基(M9)中,敲除株增殖速度落后于野生株细菌,敲除株培养时间6h、9h和22 h的平均A600值分别为0.511、0.590和0.693,相同培养时间野生株平均值为0.595、0.719和0.845.以上数据表明在营养匮乏的生存压力下,ydiU基因对于细菌的生存和增殖具有关键作用.敲除株与野生株在培养基中活性氧增高、高糖、低PH、高吲哚浓度等压力下生长速度和状态也有不同,提示ydiU基因在细菌的各种压力应激中可能发挥重要作用. 结论 成功构建了ydiU基因敲除株ATCC14028△ydiU,其在多种压力培养基中显示出与野生株不同的生长特性,为进一步探究YdiU蛋白的功能提供了良好的基础和思路.
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