【摘 要】
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构建了山羊β-酪蛋白基因座基因打靶载体pGBC-GFP-neo,载体包含了正负筛选标记基因neo和tk,以及无启动子的GFP基因.打靶载体线性化后用脂质体包裹转染山羊乳腺上皮细胞,利用G
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所,西北农林科技大学动物科技学院,山东莱阳农学院动物科技学院
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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构建了山羊β-酪蛋白基因座基因打靶载体pGBC-GFP-neo,载体包含了正负筛选标记基因neo和tk,以及无启动子的GFP基因.打靶载体线性化后用脂质体包裹转染山羊乳腺上皮细胞,利用G418和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选,共得到抗性细胞克隆51个,对抗性克隆利用激素诱导β-酪蛋白基因启动子指导GFP表达,得到GFP表达阳性细胞克隆17个,对其中4个生长状态良好的克隆PCR检测验证后用于核移植,克隆胚发育率为59.5%,部分发育到桑椹胚或囊胚.
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