【摘 要】
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目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别.方法:利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域(iNOSp),聚合酶链反应(PCR)扩增iNOSp,克隆至
【机 构】
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重庆医科大学生物学教研室,北京地坛医院传染病研究所,重庆医科大学分子生物学教研室
【基金项目】
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中国博士后科学基金;北京市自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金
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目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别.方法:利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域(iNOSp),聚合酶链反应(PCR)扩增iNOSp,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-iNOSp报告载体;以该质粒分别转染正常人肝细胞株L02,人肝母细胞瘤细胞系HepG2,小鼠成纤维细胞NIH-3T3,人贮脂细胞(Lipocyte Ito Cell)和肝癌细胞株SMMC7721,用ELISA法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)在不同细胞系中的表达活性.结果:成功获得iNOS基因启动子的正确克隆,克隆的iNOS启动子有顺式激活下游基因的活性.pCAT3-iNOSp瞬时转染HepG2细胞的CAT表达活性最强,肝贮脂细胞Ito中CAT表达活性最弱.结论:不同细胞中iNOS启动子的表达活性不同,其表达活性与细胞类型与细胞状态密切相关.
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