【摘 要】
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将Fibrolase基因克隆入表达载体pET25b（＋）,在大肠杆菌BL21（DE3）中进行了高效表达,目的蛋白以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的40%左右.比较了直接稀释法、流加稀释法和透析法的复性
【机 构】
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西北农林科技大学农业分子生物学陕西省重点实验室,郑州大学生物工程系
【基金项目】
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西北农林科技大学农业分子生物学重点实验室基金;郑州大学人才引进基金资助项目
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将Fibrolase基因克隆入表达载体pET25b（＋）,在大肠杆菌BL21（DE3）中进行了高效表达,目的蛋白以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的40%左右.比较了直接稀释法、流加稀释法和透析法的复性效率,同时研究了温度、pH 值、初始蛋白浓度、复性液中盐酸胍浓度和氧化/还原环境等对复性的影响, 得到了较为适宜的复性条件.结果表明,采用流加稀释复性,并在4℃, pH 8.5, 1.5 mol/L盐酸胍, 1 mmo1/L GSSG, 2 mmo1/L GSH, 初始蛋白浓度10 mg/mL及稀释体积为50倍
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