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摘要:目的 探讨电针不同穴位对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)模型大鼠的效应差异。方法 采用急慢性应激刺激法制作D-IBS大鼠模型。将实验动物分为对照组、模型组、天枢+足三里组、太冲+足三里组,针刺组分别给予双侧相应穴位电针刺激20 min,隔日1次,共治疗7次。观察各组大鼠体征状况,检测各组大鼠血浆5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量。结果 与对照组比较,模型组大鼠血浆5-HT、NE含量明显增加,CGRP含量降低(P<0.05);与模型组比较,针刺组大鼠5-HT、NE含量明显降低,CGRP含量升高(P<0.05);两针刺组间比较无明显差异。结论 针刺“太冲”和“天枢”可能通过降低模型大鼠血浆5-HT、NE含量,增加CGRP含量达到治疗D-IBS的目的。
关键词:腹泻型肠易激综合征;电针;5-羟色胺;去甲肾上腺素;降钙素基因相关肽;大鼠
DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2015.10.015
中图分类号:R245 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2015)10-0050-04
Abstract:Objective To discuss the effects of electroacupuncture intervention in different acupoints of rats models with diarrhea type irritable bowel syndrome (D-IBS). Methods The rat models were established with acute and chronic stimulation. The rats were divided into the normal control group, model group, “Taichong” (LR3) + “Zusanli” (ST36) group, and “Tianshu” (ST25) + “Zusanli” (ST36) group. Electroacupuncture was applied to bilateral corresponding acupoints for 20 minutes, every other day for 7 times. The physical signs of each rat were observed. The contents of 5-HT, NE and CGRP in the rats’ plasma were detected by sandwich ELISA. Results Compared with the normal group, the contents of 5-HT and NE in the model group were obviously higher and the content of CGRP decreased (P<0.05). Compared with the model group, the contents of 5-HT and NE in all treatment groups were lower and the content of CGRP increased (P<0.05). There was no difference between the “Taichong” (LR3) + “Zusanli” (ST36) and “Tianshu” (ST25) + “Zusanli” (ST36) groups. Conclusion The mechanism of electroacupuncture may be realized through lowering the contents of 5-HT and NE in the model rats and increasing the content of CGRP to treat D-IBS.
Key words:D-IBS;electroacupuncture;5-HT;NE;CGRP;rats
肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是临床中较常见的功能性肠道疾病,主要表现为腹痛、腹胀不适及大便次数增多、粪质稀薄等腹泻表现,或大便难排、粪质干结等便秘表现,或者腹泻与便秘交替出现等。其中以腹泻型肠易激综合征(diarrhea type irritable bowel syndrome,D-IBS)最为多见。研究表明,IBS发病主要是精神心理因素引起神经-内分泌-免疫网络调控失常引起。脑肠间的联系可能是通过神经肽类物质在神经系统及胃肠道效应细胞间传递而实现[1]。这些神经肽质不但存在于周围神经系统,也存在于中枢神经系统,各种脑肠肽间存在着相互作用,其中降钙素基因相关肽(CGRP)、5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)等脑肠肽在IBS发病中发挥着重要作用。本研究选用“太冲”+“足三里”、“天枢”+“足三里”,分别观察电针2组穴位对D-IBS大鼠血浆中CGRP、NE和5-HT的影响,探讨电针不同穴位对D-IBS模型大鼠的效应差异,为临床针刺治疗D-IBS提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
SPF级健康Wistar大鼠60只,体质量(220±20)g,雌雄各半,山东鲁抗医药股份有限公司实验动物中心,许可证号SCXK(鲁)20130001。将动物平衡性饲养7 d,饲养环境温度为24~26 ℃,相对湿度45%~65%,通风良好。随机数字法将大鼠分为对照组、模型组、天枢+足三里组、太冲+足三里组,每组15只。
1.2 主要试剂与仪器 韩氏电针仪,型号LH202H,南京济生医疗科技医疗有限公司;多功能酶标仪,型号MD-SpectraMax M5,美国Molecular Devicas公司;光学显微镜,型号BX51,日本Olympus;CGRP、5-HT、NE酶联免疫检测试剂盒,南京建成生物工程研究所;TDL-5M型冷冻离心机,湘仪离心机仪器有限公司;DW-HL340型低温冰箱,中科美菱低温科技有限责任公司。
1.3 造模
采用慢性捆绑时夹尾刺激加冰水游泳联合刺激制备D-IBS大鼠模型[2]。模型组和针刺组大鼠从第7日开始捆绑并夹尾刺激,每日捆绑1次,每次30 min,夹尾每次1 min,每日2~3次。大鼠捆绑结束后于6 ℃冰水游泳3 min,断水24 h,禁食48 h,1周内各1次,使之不能预料刺激的发生。模型制备21 d结束,对模型进行行为学评价。治疗前对大鼠进行肠道敏感性评估,即肠道痛觉敏感性评估-腹部撤回反射(AWR)评分[3-4]≥2分的大鼠为造模成功。同时观察大鼠精神状况、摄食、体质量及大便情况。对照组不作任何处理。
1.4 针刺方法
参照文献[5]大鼠标准穴位图谱定位。针刺治疗前30 min禁食,将大鼠固定在自制固定器上,常规消毒后,将毫针刺入相应穴位,“足三里”直刺7 mm,“天枢”直刺5 mm,“太冲”直刺1 mm,针后加用韩氏电针仪,选择疏密波,频率为疏波2 Hz,密波100 Hz,电流强度为1 mA,持续30 min,每日1次,7次后检测相关指标。对照组与模型组大鼠不进行针刺操作,但同样抓取、固定。
1.5 观察指标
1.5.1 一般状况 观察各组大鼠活动状态、毛发洁净度及疏密度、毛发光泽、爪色、耳色及大便等情况。
1.5.2 5-羟色胺、去甲肾上腺素和降钙素基因相关肽含量测定 于最后1次针刺治疗结束,大鼠麻醉、腹腔静脉取血5 mL,抗凝,4 ℃、3000 r/min离心15 min,取上清液,置-80 ℃冻存备用。采用酶联免疫法测定血浆中5-HT、NE和CRGP含量。取出血浆,室温静置30 min,按照各试剂盒说明书操作。
1.5.3 组织病理学观察 分别取各组大鼠胃(胃窦部)、十二指肠(距幽门部2 cm)、结肠(距肛门5 cm)各0.5 cm,生理盐水冲洗,多聚甲醛溶液固定,HE染色,显微镜下观察胃肠组织形态学变化。
1.6 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示,组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 大鼠体征
对照组大鼠无明显变化;模型组大鼠毛发枯槁无光泽、易激惹、体质量增加缓慢;各针刺组上述症状显著减轻。对照组大鼠肛门周围干净,粪便成型,造模后大鼠腹泻体征明显,肛周污斑,粪便不成形;与模型组比较,针刺组大鼠大便颗粒数及次数显著减少,大便成形,性状较模型组大鼠显著改善。
2.2 肠道病理学形态观察结果
各组大鼠胃黏膜结构清楚完整,无充血、水肿、溃疡和炎症细胞浸润等组织学改变,胃窦部平滑肌细胞及腺体细胞排列整齐紧密,细胞的形状规则,间隙均匀;各组大鼠肠黏膜结构清晰完整,无充血、水肿、溃疡及炎症细胞浸润等组织学改变。
2.3 针刺对大鼠血浆5-羟色胺、去甲肾上腺素和降钙素基因相关肽含量的影响
与对照组比较,模型组大鼠血浆5-HT和NE含量升高、CGRP含量降低(P<0.05);与模型组比较,针刺组大鼠血浆5-HT和NE含量降低、CGRP含量升高(P<0.05);针刺组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表1。
3 讨论
D-IBS属中医“泄泻”“腹痛”“痛泄”“久泄”等范畴。5-HT、CGRP、NE等脑肠肽作为肠道肽能神经释放的神经递质或调节介质发挥作用,作用于胃肠道感觉神经末梢或平滑肌细胞的相应受体,调节胃肠道功能。针刺治疗D-IBS具有较好的临床疗效,以足阳明胃经穴为首选取穴,足厥阴肝经为配穴。115篇病例分析表明,临床治疗IBS的穴位以健脾和胃、配合疏肝理气为最多,其中以天枢、足三里、太冲三穴居所取穴次数之首[6],太冲、大肠俞、脾俞、中脘、上巨虚、关元等为常用穴位[7]。肝郁脾虚是D-IBS发病的病理基础,足三里是足阳明胃经的合穴,具有和胃健脾、补中益气、通调腑气、扶正祛邪之功能。实验研究表明,电针足三里可使体内P物质、β-内啡肽和血管活性肠肽含量增加,且中枢和外周血中含量的变化呈显著正相关[8]。太冲为足厥阴肝经的原穴、输穴,为肝原气留止之处,具有疏肝解郁、平肝潜阳、清肝养血之功效。研究表明,额叶为太冲重要的大脑靶向激活区[9]。天枢为足阳明胃经腧穴,是大肠精气汇聚于腹部之募穴,是治疗大肠功能失常、腑气不通之要穴,具有疏通肠腑、消食导滞、化湿和胃、理气通便之功,对各种胃肠病及胃肠相关病证有突出的疗效。
研究表明,IBS患者中存在5-HT异常,5-HT在肠黏膜分泌与吸收、感觉、运动等功能的调节中发挥重要的作用[10-11]。本实验结果表明,应激造模后,血浆5-HT含量显著上升,表明5-HT参与IBS的发病,针刺可降低血浆中5-HT含量。有研究表明,NE可作用于不同受体调节肠道运动功能[12],IBS患者外周血、尿中NE含量高于正常人,交感神经活性增高[13-16]。也有研究显示,慢性腹痛患者血浆中NE水平与正常人无明显差异[17]。本实验结果显示,模型组大鼠血浆NE含量显著上升,表明NE参与IBS的发病过程,针刺后血浆中NE含量降低,表明NE等应激因子的异常可能是D-IBS的一个重要特点,但其如何参与IBS发病尚不明确。
CGRP是一种含有37个氨基酸残基的多肽,其生物学效应主要通过细胞内CGRP的介导,对血管平滑肌具有直接舒张作用。胃肠黏膜损伤及肌肉牵拉等伤害性刺激均可引起感觉神经元释放CGRP,可直接作用于胃肠平滑肌表面上的CGRP受体,抑制胃肠运动。应激状态下CGRP在胃肠组织及血清中的浓度均升高,胃黏膜CGRP含量于应激早期显著降低,后期逐渐升高至正常水平,促进CGRP合成则减轻胃黏膜损伤因子的损害作用。本实验结果显示,模型大鼠血浆中CGRP含量降低,提示IBS发病与CGRP含量变化存在相关性,与文献报道一致[18-19]。针刺后CGRP含量升高,表明针刺对CGRP具有良性调整作用。 综上,本实验中D-IBS模型大鼠5-HT、CGRP和NE含量均发生异常改变,其中5-HT和NE都有不同程度升高,而CGRP含量则明显降低,表明机体内5-HT、CGRP和NE含量变化与肠动力异常、心理行为学改变及内脏高敏等有相关性。体内胃肠激素分布异常的改变,可能与应激导致脑-肠互动平衡紊乱有关。电针治疗则对这种紊乱恢复平衡具有良好的调节作用。电针能够通过改善体内5-HT、NE和CGRP的异常表达,使之恢复正常,从而达到治疗D-IBS的目的。太冲+足三里组可以改善D-IBS大鼠的症状,与天枢+足三里组比较无明显差异,表明“太冲”在D-IBS治疗过程中起重要作用,其机制有待于进一步探讨。
参考文献:
[1] 李宁宁,方秀才.脑-肠互动在肠易激综合征发病中的作用[J].胃肠病学和肝病学杂志,2013,22(2):163-166.
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(收稿日期:2015-04-08)
(修回日期:2015-04-25;编辑:华强)
关键词:腹泻型肠易激综合征;电针;5-羟色胺;去甲肾上腺素;降钙素基因相关肽;大鼠
DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2015.10.015
中图分类号:R245 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2015)10-0050-04
Abstract:Objective To discuss the effects of electroacupuncture intervention in different acupoints of rats models with diarrhea type irritable bowel syndrome (D-IBS). Methods The rat models were established with acute and chronic stimulation. The rats were divided into the normal control group, model group, “Taichong” (LR3) + “Zusanli” (ST36) group, and “Tianshu” (ST25) + “Zusanli” (ST36) group. Electroacupuncture was applied to bilateral corresponding acupoints for 20 minutes, every other day for 7 times. The physical signs of each rat were observed. The contents of 5-HT, NE and CGRP in the rats’ plasma were detected by sandwich ELISA. Results Compared with the normal group, the contents of 5-HT and NE in the model group were obviously higher and the content of CGRP decreased (P<0.05). Compared with the model group, the contents of 5-HT and NE in all treatment groups were lower and the content of CGRP increased (P<0.05). There was no difference between the “Taichong” (LR3) + “Zusanli” (ST36) and “Tianshu” (ST25) + “Zusanli” (ST36) groups. Conclusion The mechanism of electroacupuncture may be realized through lowering the contents of 5-HT and NE in the model rats and increasing the content of CGRP to treat D-IBS.
Key words:D-IBS;electroacupuncture;5-HT;NE;CGRP;rats
肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是临床中较常见的功能性肠道疾病,主要表现为腹痛、腹胀不适及大便次数增多、粪质稀薄等腹泻表现,或大便难排、粪质干结等便秘表现,或者腹泻与便秘交替出现等。其中以腹泻型肠易激综合征(diarrhea type irritable bowel syndrome,D-IBS)最为多见。研究表明,IBS发病主要是精神心理因素引起神经-内分泌-免疫网络调控失常引起。脑肠间的联系可能是通过神经肽类物质在神经系统及胃肠道效应细胞间传递而实现[1]。这些神经肽质不但存在于周围神经系统,也存在于中枢神经系统,各种脑肠肽间存在着相互作用,其中降钙素基因相关肽(CGRP)、5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)等脑肠肽在IBS发病中发挥着重要作用。本研究选用“太冲”+“足三里”、“天枢”+“足三里”,分别观察电针2组穴位对D-IBS大鼠血浆中CGRP、NE和5-HT的影响,探讨电针不同穴位对D-IBS模型大鼠的效应差异,为临床针刺治疗D-IBS提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
SPF级健康Wistar大鼠60只,体质量(220±20)g,雌雄各半,山东鲁抗医药股份有限公司实验动物中心,许可证号SCXK(鲁)20130001。将动物平衡性饲养7 d,饲养环境温度为24~26 ℃,相对湿度45%~65%,通风良好。随机数字法将大鼠分为对照组、模型组、天枢+足三里组、太冲+足三里组,每组15只。
1.2 主要试剂与仪器 韩氏电针仪,型号LH202H,南京济生医疗科技医疗有限公司;多功能酶标仪,型号MD-SpectraMax M5,美国Molecular Devicas公司;光学显微镜,型号BX51,日本Olympus;CGRP、5-HT、NE酶联免疫检测试剂盒,南京建成生物工程研究所;TDL-5M型冷冻离心机,湘仪离心机仪器有限公司;DW-HL340型低温冰箱,中科美菱低温科技有限责任公司。
1.3 造模
采用慢性捆绑时夹尾刺激加冰水游泳联合刺激制备D-IBS大鼠模型[2]。模型组和针刺组大鼠从第7日开始捆绑并夹尾刺激,每日捆绑1次,每次30 min,夹尾每次1 min,每日2~3次。大鼠捆绑结束后于6 ℃冰水游泳3 min,断水24 h,禁食48 h,1周内各1次,使之不能预料刺激的发生。模型制备21 d结束,对模型进行行为学评价。治疗前对大鼠进行肠道敏感性评估,即肠道痛觉敏感性评估-腹部撤回反射(AWR)评分[3-4]≥2分的大鼠为造模成功。同时观察大鼠精神状况、摄食、体质量及大便情况。对照组不作任何处理。
1.4 针刺方法
参照文献[5]大鼠标准穴位图谱定位。针刺治疗前30 min禁食,将大鼠固定在自制固定器上,常规消毒后,将毫针刺入相应穴位,“足三里”直刺7 mm,“天枢”直刺5 mm,“太冲”直刺1 mm,针后加用韩氏电针仪,选择疏密波,频率为疏波2 Hz,密波100 Hz,电流强度为1 mA,持续30 min,每日1次,7次后检测相关指标。对照组与模型组大鼠不进行针刺操作,但同样抓取、固定。
1.5 观察指标
1.5.1 一般状况 观察各组大鼠活动状态、毛发洁净度及疏密度、毛发光泽、爪色、耳色及大便等情况。
1.5.2 5-羟色胺、去甲肾上腺素和降钙素基因相关肽含量测定 于最后1次针刺治疗结束,大鼠麻醉、腹腔静脉取血5 mL,抗凝,4 ℃、3000 r/min离心15 min,取上清液,置-80 ℃冻存备用。采用酶联免疫法测定血浆中5-HT、NE和CRGP含量。取出血浆,室温静置30 min,按照各试剂盒说明书操作。
1.5.3 组织病理学观察 分别取各组大鼠胃(胃窦部)、十二指肠(距幽门部2 cm)、结肠(距肛门5 cm)各0.5 cm,生理盐水冲洗,多聚甲醛溶液固定,HE染色,显微镜下观察胃肠组织形态学变化。
1.6 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示,组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 大鼠体征
对照组大鼠无明显变化;模型组大鼠毛发枯槁无光泽、易激惹、体质量增加缓慢;各针刺组上述症状显著减轻。对照组大鼠肛门周围干净,粪便成型,造模后大鼠腹泻体征明显,肛周污斑,粪便不成形;与模型组比较,针刺组大鼠大便颗粒数及次数显著减少,大便成形,性状较模型组大鼠显著改善。
2.2 肠道病理学形态观察结果
各组大鼠胃黏膜结构清楚完整,无充血、水肿、溃疡和炎症细胞浸润等组织学改变,胃窦部平滑肌细胞及腺体细胞排列整齐紧密,细胞的形状规则,间隙均匀;各组大鼠肠黏膜结构清晰完整,无充血、水肿、溃疡及炎症细胞浸润等组织学改变。
2.3 针刺对大鼠血浆5-羟色胺、去甲肾上腺素和降钙素基因相关肽含量的影响
与对照组比较,模型组大鼠血浆5-HT和NE含量升高、CGRP含量降低(P<0.05);与模型组比较,针刺组大鼠血浆5-HT和NE含量降低、CGRP含量升高(P<0.05);针刺组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表1。
3 讨论
D-IBS属中医“泄泻”“腹痛”“痛泄”“久泄”等范畴。5-HT、CGRP、NE等脑肠肽作为肠道肽能神经释放的神经递质或调节介质发挥作用,作用于胃肠道感觉神经末梢或平滑肌细胞的相应受体,调节胃肠道功能。针刺治疗D-IBS具有较好的临床疗效,以足阳明胃经穴为首选取穴,足厥阴肝经为配穴。115篇病例分析表明,临床治疗IBS的穴位以健脾和胃、配合疏肝理气为最多,其中以天枢、足三里、太冲三穴居所取穴次数之首[6],太冲、大肠俞、脾俞、中脘、上巨虚、关元等为常用穴位[7]。肝郁脾虚是D-IBS发病的病理基础,足三里是足阳明胃经的合穴,具有和胃健脾、补中益气、通调腑气、扶正祛邪之功能。实验研究表明,电针足三里可使体内P物质、β-内啡肽和血管活性肠肽含量增加,且中枢和外周血中含量的变化呈显著正相关[8]。太冲为足厥阴肝经的原穴、输穴,为肝原气留止之处,具有疏肝解郁、平肝潜阳、清肝养血之功效。研究表明,额叶为太冲重要的大脑靶向激活区[9]。天枢为足阳明胃经腧穴,是大肠精气汇聚于腹部之募穴,是治疗大肠功能失常、腑气不通之要穴,具有疏通肠腑、消食导滞、化湿和胃、理气通便之功,对各种胃肠病及胃肠相关病证有突出的疗效。
研究表明,IBS患者中存在5-HT异常,5-HT在肠黏膜分泌与吸收、感觉、运动等功能的调节中发挥重要的作用[10-11]。本实验结果表明,应激造模后,血浆5-HT含量显著上升,表明5-HT参与IBS的发病,针刺可降低血浆中5-HT含量。有研究表明,NE可作用于不同受体调节肠道运动功能[12],IBS患者外周血、尿中NE含量高于正常人,交感神经活性增高[13-16]。也有研究显示,慢性腹痛患者血浆中NE水平与正常人无明显差异[17]。本实验结果显示,模型组大鼠血浆NE含量显著上升,表明NE参与IBS的发病过程,针刺后血浆中NE含量降低,表明NE等应激因子的异常可能是D-IBS的一个重要特点,但其如何参与IBS发病尚不明确。
CGRP是一种含有37个氨基酸残基的多肽,其生物学效应主要通过细胞内CGRP的介导,对血管平滑肌具有直接舒张作用。胃肠黏膜损伤及肌肉牵拉等伤害性刺激均可引起感觉神经元释放CGRP,可直接作用于胃肠平滑肌表面上的CGRP受体,抑制胃肠运动。应激状态下CGRP在胃肠组织及血清中的浓度均升高,胃黏膜CGRP含量于应激早期显著降低,后期逐渐升高至正常水平,促进CGRP合成则减轻胃黏膜损伤因子的损害作用。本实验结果显示,模型大鼠血浆中CGRP含量降低,提示IBS发病与CGRP含量变化存在相关性,与文献报道一致[18-19]。针刺后CGRP含量升高,表明针刺对CGRP具有良性调整作用。 综上,本实验中D-IBS模型大鼠5-HT、CGRP和NE含量均发生异常改变,其中5-HT和NE都有不同程度升高,而CGRP含量则明显降低,表明机体内5-HT、CGRP和NE含量变化与肠动力异常、心理行为学改变及内脏高敏等有相关性。体内胃肠激素分布异常的改变,可能与应激导致脑-肠互动平衡紊乱有关。电针治疗则对这种紊乱恢复平衡具有良好的调节作用。电针能够通过改善体内5-HT、NE和CGRP的异常表达,使之恢复正常,从而达到治疗D-IBS的目的。太冲+足三里组可以改善D-IBS大鼠的症状,与天枢+足三里组比较无明显差异,表明“太冲”在D-IBS治疗过程中起重要作用,其机制有待于进一步探讨。
参考文献:
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(收稿日期:2015-04-08)
(修回日期:2015-04-25;编辑:华强)