粪产碱杆菌青霉素G酰化酶在大肠杆菌中组成型表达及分离纯化

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：editzhang

【摘要】

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将粪产碱杆菌青霉素G酰化酶基因构建重组表达质粒pKKFPGA,pKKFPGA再转化宿主菌DH5α,所得重组菌不需诱导便能高效表达青霉素G酰化酶,表达量达2590u/L,比野生型粪产碱杆菌表达

【作者】

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杨志建蔡谨孙健袁中一

【机构】

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中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所,浙江大学化学工程与生物工程系,中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所

【出处】

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生物工程学报

【发表日期】

：

2004年5期

【关键词】

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青霉素G酰化酶粪产碱杆菌表达纯化包涵体大肠杆菌 penicillin acylase Alcaligenes faecalis expressio

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将粪产碱杆菌青霉素G酰化酶基因构建重组表达质粒pKKFPGA,pKKFPGA再转化宿主菌DH5α,所得重组菌不需诱导便能高效表达青霉素G酰化酶,表达量达2590u/L,比野生型粪产碱杆菌表达量高432倍,其菌体比活力达300(u/L)/A600.菌体破碎后的上清液经DEAE-Sepharose CL 6B离子交换层析和Butyl-Sepharose CL 4B疏水层析,即可得纯度提高20倍、比活为68.6u/mg的青霉素G酰化酶,两步纯化的总收率达91%.Western印迹分析表明5%的原前体青霉素酰化酶

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