【摘 要】
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目的建立脑膜炎多重PCR检测系统,以在一次扩增中快速、特异地同时检出新型隐球菌、结核杆菌、脑膜炎双球菌,用于脑膜炎病原体感染的快速诊断. 方法根据新型隐球菌URA保守序列
【机 构】
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第四军医大学西京医院,检验科,陕西,西安,710033第四军医大学西京医院,神经内科,陕西,西安,710033;
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目的建立脑膜炎多重PCR检测系统,以在一次扩增中快速、特异地同时检出新型隐球菌、结核杆菌、脑膜炎双球菌,用于脑膜炎病原体感染的快速诊断. 方法根据新型隐球菌URA保守序列、脑膜炎双球菌基因组中特定的H.8外膜蛋白基因序列、结核分枝杆菌基因组中的IS986插入基因序列片段,分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物,采用多重PCR技术,同时检出脑脊液中的新型隐球菌、结核杆菌、脑膜炎双球菌. 结果应用多重P CR反应体系,对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果;多重PCR扩增的预期结果为:单一菌感染出现一条特异性扩增区带;混合感染应出现2条或3条特异性扩增区带,经实验达到预期的扩增结果;对15份已明确诊断的脑脊液标本,分别采用常规PCR和多重PCR进行同步扩增,结果两种扩增方法均能扩增出预期的目的片段,符合率达100%. 对20例临床脑脊液标本的PCR扩增结果分别为:新型隐球菌15%(3/20)、结核杆菌25%(5/20) 、脑膜炎双球菌10%(2/20). 结论多重PCR有效地为临床病原体的混合感染 ,以及原因不明的脑膜炎患者的快速诊断,提供了快速、准确的诊断手段. 有效地减少了脑膜炎的误诊和漏诊,更提高了检验效率.
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