调节性T细胞及其细胞因子在弱精子症患者的表达与临床意义

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  【摘 要】 目的:探索弱精子症患者调节性T细胞及其细胞因子的变化规律以及与精子质量的相关性。方法:以我院收入的60例弱精子症患者为观察组,36例健康志愿者为对照组,使用流式细胞仪检测两组的CD4+CD25+Treg 、TGF-β1 和 IL-10的含量,使用精子质量分析仪检测存活率、平均运动速度、精子活力指数等指标。结果:观察组外周血CD4+CD25+Treg的含量显著低于对照组,外周血的TGF-β1和IL-10显著低于对照组;观察组前列腺液的TGF-β1和IL-10显著低于对照组;外周血的TGF-β1和IL-10均显著低于前列腺液;两组精液量比较差异无显著性;观察组精子活率、运动速度和ATP含量指标均显著低于对照组;经Pearson检验,CD4+CD25+Treg、TGF-β1 和 IL-10 与精子活率、畸形率、运动速度、精子ATP指标之间均呈正相关性。结论:CD4+CD25+Treg免疫异常是弱精子症发病的重要影响因素。
  【关键词】 弱精子症 调节性T细胞 细胞因子
  【中图分类号】 R446.6 ;R392 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160(2014)03-0215-02
  弱精子症(asthenospermia)是指精液参数中前向运动的精子(a和b级)小于50%或a级运动的精子小于25%的异常情况,又称精子活力低下[1]。免疫因素的异常已被公认为弱精子症的病因之一[2,3],但发病机制尚不明确。CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)是一种与生殖密切相关的重要免疫细胞亚群[4,5],其细胞因子β1(TGF-β1)及白介素10(IL-10)参与了CD4+CD25+Treg 的免疫调节作用[6,7]。本项目拟通过流式细胞术检测弱精子症患者外周血及前列腺液内(Treg)及其胞内转化生长因子TGF-β1和IL-10含量,并分析以上三者与精子活力及活率的相关性,进一步阐述弱精子症与T细胞免疫的关系。
  1 资料与方法
  1.1 一般资料
  本研究以我院2012年1月~2013年6月收入的60例弱精子症患者为观察组,年龄(36.5±8.5)岁。入选标准:精液参数中a前向运动的精子(a和b级)小于50%或a级运动的精子小于25%的异常情况。排除标准:①已明确合并其他免疫疾病;②近8周内服药激素及免疫抑制剂者;③严重心、肝、肾等功能障碍者。健康对照组36例,年龄(35.8±9.2)岁,两组的人口学情况差异无统计学意义,P>0.05。
  1.2 标本采集
  外周血:清晨采集以上观察对象的静脉血约2.0ml,采用肝素钠抗凝;精液:采用手淫法采集精子约1~3ml,采用肝素钠抗凝;前列腺液:采用前列腺按摩法,采集前列腺液约0.5~1.0ml,采用肝素钠抗凝。
  1.3 检测方法
  使用抗CD4、CD25抗体,用Ficoll分离外周血的单个核细胞,向分离出的单个核细胞中加入上述两种抗体,4℃避光孵育30min,最后使用多色流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg的百分含量;采用同样方法,检测TGF-β1和IL-10的百分含量;使用精子质量分析仪检测存活率、平均运动速度、精子活力指数等指标。
  1.4 统计学方法
  采用SPSS19.0统计分析软件对研究数据进行统计分析,计量资料用平均值±标准差表示,计数资料之间的比较采用卡方检验,计量资料之间的比较使用t检验,指标之间的相关性分析采用Pearson检验,统计结果以P<0.05为差异具有统计学意义。
  2 结果
  2.1 CD4+CD25+Treg及细胞因子
  观察组外周血CD4+CD25+Treg的含量占外周血淋巴细胞比例为(3.41±1.34)%,显著低于对照组的比例(6.42±1.02)%;观察组外周血的TGF-β1和IL-10分别为(99.23±89.46)ng/ l和(19.53±7.32)ng/ l,均显著低于对照组的(134.28±99.44)ng/ l和(40.12±3.58)ng/ l;观察组前列腺液的TGF-β1和IL-10分别为(142.35±118.36)ng/ l和(30.89±14.55)ng/ l,均显著低于对照组的(191.47±138.77)ng/ l和(55.68±16.28)ng/ l;外周血的TGF-β1和IL-10均显著低于前列腺液,P<0.05,具体见表1。
  表1 两组CD4+CD25+Treg及细胞因子情况
  **与对照组比较P<0.05,△与外周血比较P<0.05
  2.2 精液常规
  两组精液量比较差异无显著性,P>0.05;观察组精子活率、运动速度和ATP含量指标均显著低于对照组,P<0.05,具体见表2。
  表2 两组精液常规比较
  **与对照组比较P<0.05
  2.3 相关性分析
  经Pearson检验,CD4+CD25+Treg、TGF-β1 和 IL-10 与精子活率、畸形率、运动速度、精子ATP指标之间均呈正相关性(所有r>0.4,P<0.01)。
  3 讨论
  弱精子症占所有男性不育致病因素的半数以上[8],引发弱精子症的原因很多,主要有生殖道感染、免疫因素、精索静脉曲张、内分泌因素以及先天性疾病等[9]。目前弱精子症的免疫发病机制尚未明确,是其治疗效果欠佳的主要原因之一。深入研究弱精子症的免疫学发病机制,可为开发弱精子症新型药物如免疫调节剂打下基础。
  CD4+CD25+Treg在前列腺的免疫失衡中起到重要作用[10]。CD4+CD25+Treg是近年来发现的具有独特免疫调节作用的抑制性T细胞,其活化后能抑制CD4+和CD8+T细胞,且可以抑制過度免疫性损伤[11]。CD4+CD25+Treg所分泌的细胞因子中,TGF-β1 和 IL-10最为重要,TGF-β1是一种上皮细胞增殖抑制剂,能抑制多种细胞增殖,IL-10是发挥免疫抑制功能的主要免疫抑制因子[12,13]。
  本研究从T细胞免疫学角度研究弱精子症患者调节性T细胞及其细胞因子的表达,总结弱精子症患者Treg及其细胞因子的变化规律,以及弱精子症患者CD4+CD25+Treg及其细胞因子含量与精子质量的相关性。研究结果表明,观察组外周血CD4+CD25+Treg的含量显著低于对照组,外周血的TGF-β1和IL-10显著低于对照组;观察组前列腺液的TGF-β1和IL-10显著低于对照组;外周血的TGF-β1和IL-10均显著低于前列腺液;两组精液量比较差异无显著性;观察组精子活率、运动速度和ATP含量指标均显著低于对照组;经Pearson检验,CD4+CD25+Treg、TGF-β1和IL-10与精子活率、畸形率、运动速度、精子ATP指标之间均呈正相关性。
  综上所述,对于弱精子症患者而言,CD4+CD25+Treg含量和功能的异常,导致TGF-β1 和 IL-10 细胞因子减少进而引发免疫抑制功能下降,导致了前列腺的免疫反应过强产生了抗精子抗体,影响精子的活动能力、运动能力以及穿透能力。因此,CD4+CD25+Treg免疫异常是弱精子症发病的重要影响因素。
  参考文献
  [1]刘群龙,蔡志明. 无精及少弱精子症研究进展[J]. 现代诊断与治疗. 2008,19(02):84-87.
  [2] Prad ignacA, Dem and RM, Cranz C, et al. Antisperm Atozoa l Autoantibody and Genital Infection [J]. Urol Int. 1991, 46 ( 1):18- 21.
  [3] 郭雪华,郑连文. 弱精子症的研究进展[J]. 中国男科学杂志. 2008,22(06):54-56.
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