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【摘 要】 目的：探索弱精子症患者调节性T细胞及其细胞因子的变化规律以及与精子质量的相关性。方法：以我院收入的60例弱精子症患者为观察组，36例健康志愿者为对照组，使用流式细胞仪检测两组的CD4+CD25+Treg 、TGF-β1 和 IL-10的含量，使用精子质量分析仪检测存活率、平均运动速度、精子活力指数等指标。结果：观察组外周血CD4+CD25+Treg的含量显著低于对照组，外周血的TGF-β1和IL-10显著低于对照组；观察组前列腺液的TGF-β1和IL-10显著低于对照组；外周血的TGF-β1和IL-10均显著低于前列腺液；两组精液量比较差异无显著性；观察组精子活率、运动速度和ATP含量指标均显著低于对照组；经Pearson检验，CD4+CD25+Treg、TGF-β1 和 IL-10 与精子活率、畸形率、运动速度、精子ATP指标之间均呈正相关性。结论：CD4+CD25+Treg免疫异常是弱精子症发病的重要影响因素。
【关键词】 弱精子症 调节性T细胞 细胞因子
【中图分类号】 R446.6 ；R392 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）03-0215-02
弱精子症（asthenospermia）是指精液参数中前向运动的精子（a和b级）小于50%或a级运动的精子小于25%的异常情况，又称精子活力低下[1]。免疫因素的异常已被公认为弱精子症的病因之一[2，3]，但发病机制尚不明确。CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）是一种与生殖密切相关的重要免疫细胞亚群[4，5]，其细胞因子β1（TGF-β1）及白介素10（IL-10）参与了CD4+CD25+Treg 的免疫调节作用[6，7]。本项目拟通过流式细胞术检测弱精子症患者外周血及前列腺液内（Treg）及其胞内转化生长因子TGF-β1和IL-10含量，并分析以上三者与精子活力及活率的相关性，进一步阐述弱精子症与T细胞免疫的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本研究以我院2012年1月～2013年6月收入的60例弱精子症患者为观察组，年龄（36.5±8.5）岁。入选标准：精液参数中a前向运动的精子（a和b级）小于50%或a级运动的精子小于25%的异常情况。排除标准：①已明确合并其他免疫疾病；②近8周内服药激素及免疫抑制剂者；③严重心、肝、肾等功能障碍者。健康对照组36例，年龄（35.8±9.2）岁，两组的人口学情况差异无统计学意义，P>0.05。
1.2 标本采集
外周血：清晨采集以上观察对象的静脉血约2.0ml，采用肝素钠抗凝；精液：采用手淫法采集精子约1～3ml，采用肝素钠抗凝；前列腺液：采用前列腺按摩法，采集前列腺液约0.5～1.0ml，采用肝素钠抗凝。
1.3 检测方法
使用抗CD4、CD25抗体，用Ficoll分离外周血的单个核细胞，向分离出的单个核细胞中加入上述两种抗体，4℃避光孵育30min，最后使用多色流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg的百分含量；采用同样方法，检测TGF-β1和IL-10的百分含量；使用精子质量分析仪检测存活率、平均运动速度、精子活力指数等指标。
1.4 统计学方法
采用SPSS19.0统计分析软件对研究数据进行统计分析，计量资料用平均值±标准差表示，计数资料之间的比较采用卡方检验，计量资料之间的比较使用t检验，指标之间的相关性分析采用Pearson检验，统计结果以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 CD4+CD25+Treg及细胞因子
观察组外周血CD4+CD25+Treg的含量占外周血淋巴细胞比例为（3.41±1.34）%，显著低于对照组的比例（6.42±1.02）%；观察组外周血的TGF-β1和IL-10分别为（99.23±89.46）ng/ l和（19.53±7.32）ng/ l，均显著低于对照组的（134.28±99.44）ng/ l和（40.12±3.58）ng/ l；观察组前列腺液的TGF-β1和IL-10分别为（142.35±118.36）ng/ l和（30.89±14.55）ng/ l，均显著低于对照组的（191.47±138.77）ng/ l和（55.68±16.28）ng/ l；外周血的TGF-β1和IL-10均显著低于前列腺液，P<0.05，具体见表1。
表1 两组CD4+CD25+Treg及细胞因子情况
**与对照组比较P<0.05，△与外周血比较P<0.05
2.2 精液常规
两组精液量比较差异无显著性，P>0.05；观察组精子活率、运动速度和ATP含量指标均显著低于对照组，P<0.05，具体见表2。
表2 两组精液常规比较
**与对照组比较P<0.05
2.3 相关性分析
经Pearson检验，CD4+CD25+Treg、TGF-β1 和 IL-10 与精子活率、畸形率、运动速度、精子ATP指标之间均呈正相关性（所有r>0.4，P<0.01）。
3 讨论
弱精子症占所有男性不育致病因素的半数以上[8]，引发弱精子症的原因很多，主要有生殖道感染、免疫因素、精索静脉曲张、内分泌因素以及先天性疾病等[9]。目前弱精子症的免疫发病机制尚未明确，是其治疗效果欠佳的主要原因之一。深入研究弱精子症的免疫学发病机制，可为开发弱精子症新型药物如免疫调节剂打下基础。
CD4+CD25+Treg在前列腺的免疫失衡中起到重要作用[10]。CD4+CD25+Treg是近年来发现的具有独特免疫调节作用的抑制性T细胞，其活化后能抑制CD4+和CD8+T细胞，且可以抑制過度免疫性损伤[11]。CD4+CD25+Treg所分泌的细胞因子中，TGF-β1 和 IL-10最为重要，TGF-β1是一种上皮细胞增殖抑制剂，能抑制多种细胞增殖，IL-10是发挥免疫抑制功能的主要免疫抑制因子[12，13]。
本研究从T细胞免疫学角度研究弱精子症患者调节性T细胞及其细胞因子的表达，总结弱精子症患者Treg及其细胞因子的变化规律，以及弱精子症患者CD4+CD25+Treg及其细胞因子含量与精子质量的相关性。研究结果表明，观察组外周血CD4+CD25+Treg的含量显著低于对照组，外周血的TGF-β1和IL-10显著低于对照组；观察组前列腺液的TGF-β1和IL-10显著低于对照组；外周血的TGF-β1和IL-10均显著低于前列腺液；两组精液量比较差异无显著性；观察组精子活率、运动速度和ATP含量指标均显著低于对照组；经Pearson检验，CD4+CD25+Treg、TGF-β1和IL-10与精子活率、畸形率、运动速度、精子ATP指标之间均呈正相关性。
综上所述，对于弱精子症患者而言，CD4+CD25+Treg含量和功能的异常，导致TGF-β1 和 IL-10 细胞因子减少进而引发免疫抑制功能下降，导致了前列腺的免疫反应过强产生了抗精子抗体，影响精子的活动能力、运动能力以及穿透能力。因此，CD4+CD25+Treg免疫异常是弱精子症发病的重要影响因素。
参考文献
[1]刘群龙，蔡志明. 无精及少弱精子症研究进展[J]. 现代诊断与治疗. 2008，19（02）：84-87.
[2] Prad ignacA， Dem and RM， Cranz C， et al. Antisperm Atozoa l Autoantibody and Genital Infection [J]. Urol Int. 1991， 46 （ 1）：18- 21.
[3] 郭雪华，郑连文. 弱精子症的研究进展[J]. 中国男科学杂志. 2008，22（06）：54-56.
【关键词】 弱精子症 调节性T细胞 细胞因子
【中图分类号】 R446.6 ；R392 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）03-0215-02
弱精子症（asthenospermia）是指精液参数中前向运动的精子（a和b级）小于50%或a级运动的精子小于25%的异常情况，又称精子活力低下[1]。免疫因素的异常已被公认为弱精子症的病因之一[2，3]，但发病机制尚不明确。CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）是一种与生殖密切相关的重要免疫细胞亚群[4，5]，其细胞因子β1（TGF-β1）及白介素10（IL-10）参与了CD4+CD25+Treg 的免疫调节作用[6，7]。本项目拟通过流式细胞术检测弱精子症患者外周血及前列腺液内（Treg）及其胞内转化生长因子TGF-β1和IL-10含量，并分析以上三者与精子活力及活率的相关性，进一步阐述弱精子症与T细胞免疫的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本研究以我院2012年1月～2013年6月收入的60例弱精子症患者为观察组，年龄（36.5±8.5）岁。入选标准：精液参数中a前向运动的精子（a和b级）小于50%或a级运动的精子小于25%的异常情况。排除标准：①已明确合并其他免疫疾病；②近8周内服药激素及免疫抑制剂者；③严重心、肝、肾等功能障碍者。健康对照组36例，年龄（35.8±9.2）岁，两组的人口学情况差异无统计学意义，P>0.05。
1.2 标本采集
外周血：清晨采集以上观察对象的静脉血约2.0ml，采用肝素钠抗凝；精液：采用手淫法采集精子约1～3ml，采用肝素钠抗凝；前列腺液：采用前列腺按摩法，采集前列腺液约0.5～1.0ml，采用肝素钠抗凝。
1.3 检测方法
使用抗CD4、CD25抗体，用Ficoll分离外周血的单个核细胞，向分离出的单个核细胞中加入上述两种抗体，4℃避光孵育30min，最后使用多色流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg的百分含量；采用同样方法，检测TGF-β1和IL-10的百分含量；使用精子质量分析仪检测存活率、平均运动速度、精子活力指数等指标。
1.4 统计学方法
采用SPSS19.0统计分析软件对研究数据进行统计分析，计量资料用平均值±标准差表示，计数资料之间的比较采用卡方检验，计量资料之间的比较使用t检验，指标之间的相关性分析采用Pearson检验，统计结果以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 CD4+CD25+Treg及细胞因子
观察组外周血CD4+CD25+Treg的含量占外周血淋巴细胞比例为（3.41±1.34）%，显著低于对照组的比例（6.42±1.02）%；观察组外周血的TGF-β1和IL-10分别为（99.23±89.46）ng/ l和（19.53±7.32）ng/ l，均显著低于对照组的（134.28±99.44）ng/ l和（40.12±3.58）ng/ l；观察组前列腺液的TGF-β1和IL-10分别为（142.35±118.36）ng/ l和（30.89±14.55）ng/ l，均显著低于对照组的（191.47±138.77）ng/ l和（55.68±16.28）ng/ l；外周血的TGF-β1和IL-10均显著低于前列腺液，P<0.05，具体见表1。
表1 两组CD4+CD25+Treg及细胞因子情况
**与对照组比较P<0.05，△与外周血比较P<0.05
2.2 精液常规
两组精液量比较差异无显著性，P>0.05；观察组精子活率、运动速度和ATP含量指标均显著低于对照组，P<0.05，具体见表2。
表2 两组精液常规比较
**与对照组比较P<0.05
2.3 相关性分析
经Pearson检验，CD4+CD25+Treg、TGF-β1 和 IL-10 与精子活率、畸形率、运动速度、精子ATP指标之间均呈正相关性（所有r>0.4，P<0.01）。
3 讨论
弱精子症占所有男性不育致病因素的半数以上[8]，引发弱精子症的原因很多，主要有生殖道感染、免疫因素、精索静脉曲张、内分泌因素以及先天性疾病等[9]。目前弱精子症的免疫发病机制尚未明确，是其治疗效果欠佳的主要原因之一。深入研究弱精子症的免疫学发病机制，可为开发弱精子症新型药物如免疫调节剂打下基础。
CD4+CD25+Treg在前列腺的免疫失衡中起到重要作用[10]。CD4+CD25+Treg是近年来发现的具有独特免疫调节作用的抑制性T细胞，其活化后能抑制CD4+和CD8+T细胞，且可以抑制過度免疫性损伤[11]。CD4+CD25+Treg所分泌的细胞因子中，TGF-β1 和 IL-10最为重要，TGF-β1是一种上皮细胞增殖抑制剂，能抑制多种细胞增殖，IL-10是发挥免疫抑制功能的主要免疫抑制因子[12，13]。
本研究从T细胞免疫学角度研究弱精子症患者调节性T细胞及其细胞因子的表达，总结弱精子症患者Treg及其细胞因子的变化规律，以及弱精子症患者CD4+CD25+Treg及其细胞因子含量与精子质量的相关性。研究结果表明，观察组外周血CD4+CD25+Treg的含量显著低于对照组，外周血的TGF-β1和IL-10显著低于对照组；观察组前列腺液的TGF-β1和IL-10显著低于对照组；外周血的TGF-β1和IL-10均显著低于前列腺液；两组精液量比较差异无显著性；观察组精子活率、运动速度和ATP含量指标均显著低于对照组；经Pearson检验，CD4+CD25+Treg、TGF-β1和IL-10与精子活率、畸形率、运动速度、精子ATP指标之间均呈正相关性。
综上所述，对于弱精子症患者而言，CD4+CD25+Treg含量和功能的异常，导致TGF-β1 和 IL-10 细胞因子减少进而引发免疫抑制功能下降，导致了前列腺的免疫反应过强产生了抗精子抗体，影响精子的活动能力、运动能力以及穿透能力。因此，CD4+CD25+Treg免疫异常是弱精子症发病的重要影响因素。
参考文献
[1]刘群龙，蔡志明. 无精及少弱精子症研究进展[J]. 现代诊断与治疗. 2008，19（02）：84-87.
[2] Prad ignacA， Dem and RM， Cranz C， et al. Antisperm Atozoa l Autoantibody and Genital Infection [J]. Urol Int. 1991， 46 （ 1）：18- 21.
[3] 郭雪华，郑连文. 弱精子症的研究进展[J]. 中国男科学杂志. 2008，22（06）：54-56.