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目的
研制一种新型的基因阵列,用于结核分枝杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的快速检测.
方法根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计寡核苷酸探针并制作基因阵列,用生物素标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的目的片断,与基因阵列杂交,同时以聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术及DNA测序法为对照.
结果111株结核分枝杆菌临床分离株经PCR-SSCP分析,41株RFP敏感株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同;70株耐RFP菌株中,63株(90%)SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株不同,其余7株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同.基因阵列检测结果41株RFP敏感株杂交图谱与标准株完全相同,70株耐RFP临床分离株中,63株检测到rpoB基因突变,检出率为90%;其中37株(53%)531位丝氨酸(Ser)置换,15株(21%)526位组氨酸(His)置换,11株(16%)其他位置的氨基酸置换.基因阵列检测结果与PCR-SSCP及测序结果一致.
结论用基因阵列法可简便、快速、准确地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变.