探讨节律基因Period2在卵巢上皮性癌(卵巢癌)患者癌组织中表达的意义,并探讨Period2基因在裸鼠移植瘤组织中过度表达对移植瘤生长的作用及可能机制。
方法选择2010年1月至2013年12月山西医科大学第一医院存档的卵巢癌石蜡标本22份(卵巢癌组),其中Ⅰ期8份、Ⅱ期8份、Ⅲ期6份,另选取同期卵巢良性上皮性肿瘤石蜡标本6份(良性肿瘤组),采用实时定量PCR技术和蛋白印迹(western blot)法分别检测两组患者肿瘤组织中Period2 mRNA和蛋白的表达。使用卵巢癌细胞株SKOV3细胞构建卵巢癌裸鼠移植瘤模型,实验分为3组,即重组质粒组、空质粒组、对照组,每组8只裸鼠;利用基因转染技术转染Period2基因,采用实时定量PCR技术检测转染后3组裸鼠移植瘤组织中Period2 mRNA的表达,监测裸鼠移植瘤的生长情况,并计算其抑瘤率;采用实时定量PCR技术和western blot法分别检测转染后3组裸鼠移植瘤组织中抗凋亡基因BRE、促凋亡基因TNFR1、抑癌基因NIX mRNA和蛋白的表达。
结果(1)患者肿瘤组织中Period2 mRNA的表达水平,卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为2.59±0.50、0.47±0.08、0.42±0.08,良性肿瘤组为6.59±1.05;患者肿瘤组织中Period2蛋白的表达水平,卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为0.835±0.087、0.412±0.035、0.199±0.031,良性肿瘤组为0.874±0.094。除良性肿瘤组Period2蛋白与Ⅰ期卵巢癌比较差异无统计学意义(P>0.05)外,良性肿瘤组Period2 mRNA和蛋白的表达水平均明显高于卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期(P<0.01);且随着卵巢癌期别的升高,Period2 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。(2)转染后2周,重组质粒组裸鼠移植瘤组织中Period2 mRNA的表达水平为6.11±0.56,明显高于空质粒组、对照组(分别为0.50± 0.09、0.44±0.08;P<0.01);重组质粒组移植瘤体积为(486±70)mm3,明显小于空质粒组、对照组[分别为(835±106)、(846±110)mm3;P<0.01 ];重组质粒组抑瘤率高达42.9%,明显高于空质粒组、对照组(分别为3.8%和0;P<0.05)。(3)重组质粒组移植瘤组织中BRE mRNA和蛋白的表达水平分别为0.48± 0.16、0.432±0.010,均明显低于空质粒组(分别为12.69±0.86、0.730±0.019)、对照组(分别为13.48± 0.98、0.703±0.022;P<0.05),TNFR1、NIX mRNA和蛋白的表达水平均明显高于空质粒组、对照组(P<0.05)。
结论晚期卵巢癌组织中Period2 mRNA和蛋白表达缺失。转染并稳定表达Period2基因后可使卵巢癌细胞的生长速度减慢,抑瘤率明显提高。Period2基因可能通过抑制BRE基因,促进TNFR1、NIX基因的表达而促进卵巢癌细胞的凋亡,从而发挥抑瘤作用。