【摘 要】
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目的 探讨PTEN基因对RPMI8226细胞增殖、细胞周期和侵袭力的影响及其分子作用机制.方法 应用PTEN siRNA转染RPMI8226细胞,封闭内源性PTEN mRNA表达.MTT法检测细胞生长曲线；流
【机 构】
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河北省人民医院血液内科,河北 石家庄,050000;四川大学华西医院血液科
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目的 探讨PTEN基因对RPMI8226细胞增殖、细胞周期和侵袭力的影响及其分子作用机制.方法 应用PTEN siRNA转染RPMI8226细胞,封闭内源性PTEN mRNA表达.MTT法检测细胞生长曲线；流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡；Transwell小室实验检测细胞侵袭活性；荧光定量PCR(FQ-PCR)检测mRNA水平变化,Western印迹检测蛋白水平变化.结果 PTEN siRNA能明显抑制RPMI8226细胞PTEN mRNA及蛋白表达.MTT结果显示,转染后4d,与NS-siRNA组相比,PTEN-siRNA组细胞生存率为(141.55±8.34)％(P＜0.01).细胞周期分析显示PTEN-siRNA转染RPMI8226细胞48 h后,与未转染细胞相比,处于G0/G1期细胞比例升高,G2/M期和S期细胞比例降低,凋亡峰显示凋亡的细胞比例减少.PTEN-siRNA转染RPMI8226细胞后24h,未转染组、NS-siRNA转染组和PTEN-siRNA转染组黏附于下室面的细胞数量分别为:49.33±7.63、47.17 ±7.76和79.50±11.89,NS-siRNA和PTEN-siRNA组相比,差异显著(P＜0.01).转染PTEN siRNA后凋亡相关基因Survivin mRNA及蛋白表达水平增加,Caspase-3/-7 mRNA及蛋白活性表达水平减低.FAK mRNA MMP-2,MMP-9 mRNA p-FAK蛋白表达水平升高.结论 转染PTEN siRNA能够促进RPMI8226细胞增殖及侵袭能力,抑制细胞凋亡.
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