重组pEGFP-Mfn2真核表达载体的构建及转染人乳腺癌细胞系MCF-7

来源 :中华肿瘤防治杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:songjinyi2001
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目的:构建Mfn2基因真核表达载体,将此载体转染入人乳腺癌细胞系MCF-7,并观察高表达Mfn2对MCF-7增殖的影响。方法:1)设计pEG-FP-Mfn2质粒,并将其用脂质体转染入人乳腺癌细胞系MCF-7;2)DNA测序、RT-PCR法、流式细胞术及免疫细胞化学法鉴定以上述载体是否转染成功;3)MTT法检测转染后Mfn2对MCF-7细胞增殖的影响。结果:1)重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入小鼠Mfn2的全长编码基因,DNA序列测定的结果与预期设计基本一致。普通PCR琼脂糖凝胶电泳显示转染后MCF-7细胞中存在外源性Mfn2的表达。2)琼脂糖凝胶电泳检测显示实验组中Mfn2较对照组明显升高,转染Mfn2后MTT法检测转染pEGFP-Mfn2组的MCF-7细胞数明显低于空白对照组与转染pEGFP-N1组,P<0.05。3)细胞免疫化学显示转染Mfn2后MCF-7细胞数目减少,癌细胞出现核碎裂现象。结论:成功构建了Mfn2基因真核表达载体,并成功转染MCF-7细胞。转染Mfn2后,MCF-7细胞的增殖受到明显抑制。
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