探讨促红细胞生成素(EPO)对输尿管梗阻-解除梗阻后(BUO-R)幼鼠肾脏水通道蛋白2(AQP2)表达及功能的影响。
方法幼年SD大鼠32只,按随机数字表法随机均分为BUO组、BUO-R组、BUO-R+EPO组和假手术(Sham)组,每组8只。实验组大鼠均行双侧输尿管结扎,BUO组梗阻24 h后处死;BUO-R组和BUO-R+EPO组梗阻24 h后解除梗阻,BUO-R+EPO组分别于解除梗阻后2 h、6 h、12 h、24 h和36 h腹腔注射EPO(每次剂量500 U/kg),48 h后处死;BUO-R组在相同时间点腹腔注射等量9 g/L盐水,48 h后处死;Sham组只分离输尿管,不结扎,72 h后处死。幼鼠处死前,代谢笼内收集尿液进行渗透压检测。留取双侧肾脏标本,采用Real-time PCR、免疫组织化学及Western blot检测各组肾脏组织中AQP2 mRNA及蛋白表达水平。
结果Sham组尿液渗透压最高,BUO-R+EPO组次之,BUO-R组最低(P<0.05)。免疫组织化学结果显示BUO组、BUO-R组和BUO-R+EPO组集合管管壁变薄、管腔增大,经Image-Pro Plus图像分析软件统计分析,BUO组内髓集合管AQP2阳性染色弱于其他3组,Sham组表达最强,BUO-R+EPO组和BUO-R组次之(P<0.05)。经Western blot进一步验证,BUO组AQP2蛋白表达水平低于BUO-R+EPO组、BUO-R组和Sham组(P<0.05)。经Real-time PCR检测,4组幼鼠肾脏组织中AQP2 mRNA表达水平差异有统计学意义(P<0.05),Sham组表达最多,是BUO组的(24.30±1.03)倍、BUO-R组的(10.60±1.05)倍、BUO-R+EPO组的(5.70±1.01)倍。
结论EPO可促进BUO-R幼鼠肾脏AQP2 mRNA、蛋白表达及功能恢复。