论文部分内容阅读
使用过量的N，N′-O-苯二马来酰亚胺将马来酰亚胺基导入β-D-半乳糖苷酶，然后利用豚鼠抗胰岛素Fab′铰链部的巯基与β-D-半乳糖苷酶-马来酰亚胺基反应，制备Fab′-β-D一半乳糖苷酶交联物。这种交联方法，交联物中豚鼠Fab′的回收率达55%。以4-甲基伞型酮-β-D一半乳糖苷作为酶的荧光底物，测定β-D-半乳糖苷酶活力，酶的测定极限小至10-20mol／管（反应23小时）和10-19 mol／管（反应1小时），比使用邻-硝基苯β-D-半乳糖苷作为β-D-半乳糖苷酶底物的比色定量法灵敏l000倍，也比使用对-羟基苯丙酸作为辣根过氧化酶底物的荧光定量法灵敏3～30倍，将上述Fab′-β-D-半乳糖苷酶交联物和荧光法测定β-D-半乳糖苷酶活力的方法应用于建立胰岛素的酶免疫测定技术，小至0.01μU／管的胰岛素能被测出。本方法可用于其它抗原的高灵敏度酶免疫测定。