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目的
构建重组表达载体TAT-KLF4,在E.coli BL21中高效表达并纯化融合蛋白。
方法经PCR获得编码人KLF4的开放读码框基因序列，酶切并连接到原核表达载体PET-28b-TAT-V2上，得到重组表达载体TAT-KLF4,转化大肠埃希菌，IPTG诱导TAT-KLF4融合蛋白的表达。表达产物用SDS- PAGE鉴定，亲和层析柱纯化融合蛋白，并应用Western Blot检测蛋白的特异性，应用免疫荧光检测融合蛋白转导HSF细胞的效果。
结果成功构建了TAT-KLF4融合蛋白的原核表达载体，在诱导下获得了高效表达并纯化了融合蛋白，Western Blot实验提示获得了特异性的融合蛋白。免疫荧光提示融合蛋白可快速转导入HSF细胞内。
结论为通过蛋白转导方式诱导多能干细胞提供了物质基础。