【摘 要】
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目的探究包涵体蛋白LAP-F制备、提取、纯化以及验证它对TGF-β诱导的HK-2细胞在形态学上的影响。方法通过高浓度尿素溶解包涵体,离心后将上清通过透析使蛋白复性,经镍琼脂糖
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81573068,81200305)
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目的探究包涵体蛋白LAP-F制备、提取、纯化以及验证它对TGF-β诱导的HK-2细胞在形态学上的影响。方法通过高浓度尿素溶解包涵体,离心后将上清通过透析使蛋白复性,经镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白,通过SDS-PAGE凝胶定量蛋白含量;将重组蛋白LAP-F作用于TGF-β诱导的HK-2细胞,并培养48h后通过显微镜观察细胞形态。结果诱导了LAP-F在包涵体的表达,并筛选出了高表达菌株。结论原核表达载体构建成功,成功筛选并纯化了目的蛋白;重组蛋白LAP-F可抑制TGF-β对HK-2细胞的纤维化,为后续研究LA
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