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【摘 要】本实验对升血颗粒的质量标准进行研究。含量测定方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），甲醇-0.1%磷酸溶液（9：91）为流动相，检测波长为218nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃；鉴别方法：点羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。结论：本法简便、准确，可用于升血颗粒的质量标准研究。
【关键词】升血颗粒；质量标准；研究
升血颗粒由黄芪、丹参、麦门冬、太子参等组成。升血颗粒具有增强人体免疫力，调节植物神经系统的功能。丹参具有活血调经、祛瘀止痛、凉血消痈、清心除烦、养血安神的功效。丹参素具有缩小心肌梗死范围、抑制血小板的聚集、增加血小板膜的流动性、抗脂质蛋白氧化、降低血胆固醇、保护血管屏障、扩张冠状动脉、改善神经功能缺损等作用。太子参，又名孩儿参，为石竹科多年生草本植物异叶假繁缕的块根。太子参具有补益脾肺，益气生津的功效。《陕西中草药》记载“：补气益血，健脾生津。治病后体虚，肺虚咳嗽，脾虚腹泻，小儿虚汗，心悸，口干，不思饮食。”太子参常用于治疗脾虚食少、心悸、水肿、消渴、精神疲乏等[1-5]。本实验对升血颗粒的质量标准进行研究。
1.仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪：安捷伦1100泵；安捷伦检测器；安捷伦色谱工作站；奥豪斯Explorer专业型分析天平（奥豪斯仪器上海有限公司）；半自动点样仪LINOMAT Ⅳ（瑞士CAMAG）；SHB-（III）循环水式真空泵（上海楚柏实验室设备有限公司）；DHG-9240A电热恒温鼓风干燥箱（上海和呈仪器制造有限公司）；SCQ-5201超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司）；XSYF-D 实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）；ELGA超纯水器（上海澜锐仪器科技有限公司）；RE-5210A旋转蒸发器（上海比朗仪器有限公司）。
1.2色谱柱
奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品
丹参素钠。
1.4试剂
甲醇（上海嘉浩化工有限公司）、磷酸（上海海曲化工有限公司）、甲酸（广西明利化工有限公司）、茚三酮（郑州江美化工产品有限公司）、冰醋酸（济南郭氏伟业化工有限公司）、正丁醇（广西明利化工有限公司）、乙醇（郑州江美化工产品有限公司）。
1.5试药
升血颗粒。
2.测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[6-12]。流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（9：91）为流动相，检测波长：218nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按丹参素钠峰计算应不得低于2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取丹参素钠对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取升血颗粒适量，研细，精密称定，加20毫升水超声提取5分钟，过滤，蒸干滤液，残渣加流动溶解转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4专属性试验
取黄芪、麦门冬、太子参等药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述实验方法检测，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5精密度试验
取对照品溶液按上述色谱条件，精密吸取20μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。
2.6对照品的线性考察
精密称取适量丹参素钠对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含10、20、30、40、50、60、120μg的溶液。分别精密上述溶液吸取20μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，丹参素钠在10～120μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7重现性试验
称取同一批的升血颗粒样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.55%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8准确度试验
取对照品适量分别精密加入升血颗粒中，按含量测定进行测定，计算回收率为99.6%，RSD为0.65%。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为80μg/g、82μg/g、81μg/g。
3.鉴别
取升血颗粒适量（约相当于太子参药材1g），加甲醇30ml，超声处理15分钟，滤过，回收甲醇后的残渣，再溶于甲醇2ml中，作为供试品溶液。另取太子参对照药材1g，加甲醇30ml，超声处理15分钟，滤过，回收甲醇后的残渣，再溶于甲醇2ml中，作为对照品溶液。取黄芪、丹参、麦门冬等药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述方法制成阴性对照样品。吸取上述溶液，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4：1：1）为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以0.2%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。
4.结论
本实验分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于升血颗粒中丹参素钠的含量测定。样品与太子参对照药材对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。该鉴别方法专属性强，操作简单，可用于升血颗粒中太子参的鉴别。
【参考文献】
[1]倪受东，夏伦祝，徐先祥，张睿.太子参多糖对四氧嘧啶糖尿病小鼠的治疗作用[J].安徽医药，2010（05）.
[2]熊何健，庞杰，谢主兴.太子参提取物体外抗氧化活性研究[J].南开大学学报（自然科学版），2009（06）.
[3]易智彪，薄雯映，许冬瑾，赖小平.太子参HPLC指纹图谱研究[J].中草药，2009（08）.
[4]沈祥春，彭佼，李淑芳，方泰惠，段金廒.太子参正丁醇提取部位对大鼠急性心肌梗死诱发心肺损伤的保护作用[J].中华中医药杂志，2010（05）.
[5]韩邦兴，朱志祥，姚勇，李媛媛，陈钧.不同产地太子参多糖、氨基酸含量比较分析[J].中成药，2010（03）.
[6]黄兰芷，付超美，胡慧玲，周海燕.HPLC法测定抗癌颗粒中丹参素钠的含量[J].成都中医药大学学报，2006（02）.
[7]李海燕，李振国，宋汉敏，康建，王健.HPLC测定冠心生脉口服液中丹参素钠的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010（12）.
[8]黄衍民，黄炳亮，张亚斌，潘留华，李嫦娥.高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参素钠的含量[J].中国医院药学杂志，2007（11）.
[9]刘铁明，肖康，石建国，王风，杨永丽.高效液相色谱法测定乳康片中丹参素的含量[J].医药导报，2006（09）.
[10]张文婷，寿优芳，陈碧莲，金樟照.丹参水溶性制剂中丹参素和原儿茶醛含量的考察[J].中国现代应用药学，2001（04）.
[11]陈再兴，袁长季，丁勇，谷玉宏.高效液相色谱法测定丹田降脂胶囊中丹参素钠的含量[J].辽宁中医杂志，2006（12）.
[12]陈志清，钟克俭.HPLC法测定胃宁冲剂中丹参素的含量[J].中国现代应用药学，1999（01）.
【关键词】升血颗粒；质量标准；研究
升血颗粒由黄芪、丹参、麦门冬、太子参等组成。升血颗粒具有增强人体免疫力，调节植物神经系统的功能。丹参具有活血调经、祛瘀止痛、凉血消痈、清心除烦、养血安神的功效。丹参素具有缩小心肌梗死范围、抑制血小板的聚集、增加血小板膜的流动性、抗脂质蛋白氧化、降低血胆固醇、保护血管屏障、扩张冠状动脉、改善神经功能缺损等作用。太子参，又名孩儿参，为石竹科多年生草本植物异叶假繁缕的块根。太子参具有补益脾肺，益气生津的功效。《陕西中草药》记载“：补气益血，健脾生津。治病后体虚，肺虚咳嗽，脾虚腹泻，小儿虚汗，心悸，口干，不思饮食。”太子参常用于治疗脾虚食少、心悸、水肿、消渴、精神疲乏等[1-5]。本实验对升血颗粒的质量标准进行研究。
1.仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪：安捷伦1100泵；安捷伦检测器；安捷伦色谱工作站；奥豪斯Explorer专业型分析天平（奥豪斯仪器上海有限公司）；半自动点样仪LINOMAT Ⅳ（瑞士CAMAG）；SHB-（III）循环水式真空泵（上海楚柏实验室设备有限公司）；DHG-9240A电热恒温鼓风干燥箱（上海和呈仪器制造有限公司）；SCQ-5201超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司）；XSYF-D 实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）；ELGA超纯水器（上海澜锐仪器科技有限公司）；RE-5210A旋转蒸发器（上海比朗仪器有限公司）。
1.2色谱柱
奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品
丹参素钠。
1.4试剂
甲醇（上海嘉浩化工有限公司）、磷酸（上海海曲化工有限公司）、甲酸（广西明利化工有限公司）、茚三酮（郑州江美化工产品有限公司）、冰醋酸（济南郭氏伟业化工有限公司）、正丁醇（广西明利化工有限公司）、乙醇（郑州江美化工产品有限公司）。
1.5试药
升血颗粒。
2.测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[6-12]。流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（9：91）为流动相，检测波长：218nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按丹参素钠峰计算应不得低于2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取丹参素钠对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取升血颗粒适量，研细，精密称定，加20毫升水超声提取5分钟，过滤，蒸干滤液，残渣加流动溶解转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4专属性试验
取黄芪、麦门冬、太子参等药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述实验方法检测，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5精密度试验
取对照品溶液按上述色谱条件，精密吸取20μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。
2.6对照品的线性考察
精密称取适量丹参素钠对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含10、20、30、40、50、60、120μg的溶液。分别精密上述溶液吸取20μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，丹参素钠在10～120μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7重现性试验
称取同一批的升血颗粒样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.55%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8准确度试验
取对照品适量分别精密加入升血颗粒中，按含量测定进行测定，计算回收率为99.6%，RSD为0.65%。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为80μg/g、82μg/g、81μg/g。
3.鉴别
取升血颗粒适量（约相当于太子参药材1g），加甲醇30ml，超声处理15分钟，滤过，回收甲醇后的残渣，再溶于甲醇2ml中，作为供试品溶液。另取太子参对照药材1g，加甲醇30ml，超声处理15分钟，滤过，回收甲醇后的残渣，再溶于甲醇2ml中，作为对照品溶液。取黄芪、丹参、麦门冬等药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述方法制成阴性对照样品。吸取上述溶液，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4：1：1）为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以0.2%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。
4.结论
本实验分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于升血颗粒中丹参素钠的含量测定。样品与太子参对照药材对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。该鉴别方法专属性强，操作简单，可用于升血颗粒中太子参的鉴别。
【参考文献】
[1]倪受东，夏伦祝，徐先祥，张睿.太子参多糖对四氧嘧啶糖尿病小鼠的治疗作用[J].安徽医药，2010（05）.
[2]熊何健，庞杰，谢主兴.太子参提取物体外抗氧化活性研究[J].南开大学学报（自然科学版），2009（06）.
[3]易智彪，薄雯映，许冬瑾，赖小平.太子参HPLC指纹图谱研究[J].中草药，2009（08）.
[4]沈祥春，彭佼，李淑芳，方泰惠，段金廒.太子参正丁醇提取部位对大鼠急性心肌梗死诱发心肺损伤的保护作用[J].中华中医药杂志，2010（05）.
[5]韩邦兴，朱志祥，姚勇，李媛媛，陈钧.不同产地太子参多糖、氨基酸含量比较分析[J].中成药，2010（03）.
[6]黄兰芷，付超美，胡慧玲，周海燕.HPLC法测定抗癌颗粒中丹参素钠的含量[J].成都中医药大学学报，2006（02）.
[7]李海燕，李振国，宋汉敏，康建，王健.HPLC测定冠心生脉口服液中丹参素钠的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010（12）.
[8]黄衍民，黄炳亮，张亚斌，潘留华，李嫦娥.高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参素钠的含量[J].中国医院药学杂志，2007（11）.
[9]刘铁明，肖康，石建国，王风，杨永丽.高效液相色谱法测定乳康片中丹参素的含量[J].医药导报，2006（09）.
[10]张文婷，寿优芳，陈碧莲，金樟照.丹参水溶性制剂中丹参素和原儿茶醛含量的考察[J].中国现代应用药学，2001（04）.
[11]陈再兴，袁长季，丁勇，谷玉宏.高效液相色谱法测定丹田降脂胶囊中丹参素钠的含量[J].辽宁中医杂志，2006（12）.
[12]陈志清，钟克俭.HPLC法测定胃宁冲剂中丹参素的含量[J].中国现代应用药学，1999（01）.