【摘 要】
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研究猪肝SOD的分离提取、纯化以及初步表征。以猪肝为原料,通过抽提液加热、丙酮沉淀和Sephadex G-200层析柱色谱提取、纯化Cu,Zn-SOD;在单因素试验的基础上,采用L(934)设计
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研究猪肝SOD的分离提取、纯化以及初步表征。以猪肝为原料,通过抽提液加热、丙酮沉淀和Sephadex G-200层析柱色谱提取、纯化Cu,Zn-SOD;在单因素试验的基础上,采用L(934)设计对提取工艺进行系统优化。结果表明:经过热变性,可以除去大部分杂蛋白,提高了SOD的比活力;最佳的提取条件是:在1.4%的盐浓度下,于70℃水浴中热变性10 min,然后加1.6倍体积的丙酮获得SOD粗沉淀;溶解后的粗酶液经Sephadex G-200层析柱纯化后,经SDS-PAGE电泳检测为单一条带,HPLC检测显示为单一对称峰,均表明最终得到了高纯度的SOD;紫外-可见吸收光谱和ICP-MS分析结果均表明得到的是含铜、锌的SOD,即Cu,Zn-SOD;以邻苯三酚为底物,该酶的Km值为1.574,Vmax为0.268。
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