论文部分内容阅读
目的克隆并表达中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因型代表菌株PD91的外膜蛋白A(OspA),并对其免疫保护性进行初步研究,为进一步研制莱姆病疫苗提供基础. 方法用聚合酶链反应(PCR)从莱姆病螺旋体PD91全基因组DNA中将OspA基因调出,插入原核表达载体P42,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物用SDS-PAGE、Western blot分析,并进行基因序列测定.用重组OspA(rOspA)免疫新西兰家兔,用间接免疫荧光(IFA)检测其血清特异性抗体(IgG),并进行体外中和试验,从而对其免疫保护性有初步的了解. 结果 rOspA在宿主菌内表达高效、稳定;Western blot显示其与抗OspA的多抗有较好的免疫反应性;用rOspA免疫新西兰家兔后,其血清抗体(IgG)效价显著升高(32倍),体外中和试验表明,每毫升兔抗rOspA血清可杀灭105个莱姆病螺旋体. 结论在国内首次成功地对中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因型的OspA基因进行了克隆和表达.rOspA有较好的免疫保护性,可作为多价莱姆病疫苗的一种成分.