【摘 要】
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目的：构建人源化抗CD19嵌合抗原受体NK细胞（hCAR19-NK），并且在体外证明其对CD19阳性血液病肿瘤细胞杀伤作用。方法：构建人源化的第二代CD19 CAR的逆转录病毒载体，使用辐照的K562-4-1BBL-mIL21细胞刺激外周血来源的NK细胞，通过逆转录病毒转导NK细胞获得hCAR19-NK细胞；采用流式细胞术和Western blot检测转导效率；采用4 h荧光杀伤实验和ELISA法
【基金项目】
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北京市科技计划脑科学专项基金项目（Z161100000216136）；
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目的：构建人源化抗CD19嵌合抗原受体NK细胞（hCAR19-NK），并且在体外证明其对CD19阳性血液病肿瘤细胞杀伤作用。方法：构建人源化的第二代CD19 CAR的逆转录病毒载体，使用辐照的K562-4-1BBL-mIL21细胞刺激外周血来源的NK细胞，通过逆转录病毒转导NK细胞获得hCAR19-NK细胞；采用流式细胞术和Western blot检测转导效率；采用4 h荧光杀伤实验和ELISA法检测hCAR19-NK细胞对淋巴瘤细胞的杀伤能力和IFN-γ释放水平；采用CD107a脱颗粒实验评估淋巴瘤细胞对hCAR19-NK细胞的特异性激活；比较对照组（Mock）和hCAR19-NK组细胞扩增倍数。结果：流式细胞术和Western blot证明构建的CAR可以成功转导外周血来源的NK细胞；4 h荧光杀伤实验证明随着效靶比例升高，hCAR19-NK对Raji-GL杀伤率增加，明显高于Mock组；ELISA法检测显示Raji和K562-CD19作为靶细胞时，hCAR19-NK细胞的IFN-γ释放明显高于Mock组（P＜0.01）;CD19+细胞（Raji和K562-CD19）可以特异性刺激hCAR19-NK细胞表达CD107a，具有统计学意义（P＜0.05）;Mock组和hCAR19-NK组细胞扩增倍数无显著差异。结论：成功构建了可以杀伤CD19+肿瘤的人源化scFv的第二代hCAR19-NK细胞。
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