论文部分内容阅读
基金项目:
作者简介:郭钦安(1983-),男,汉族,本科,主管中药师,研究方向为中药材、中成药质量控制。E-mail:guoqinan123@163.com
通信作者:
【摘 要】 目的:建立止眩胶囊制剂中丹酚酸B的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法:色谱柱waters xterra C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇:乙腈(3∶[KG-*3/5]1)-1.0%甲酸溶液(34∶[KG-*3/5]66),流速1mL/min,柱温:30℃,检测波长286nm。结果:丹酚酸B的进样量在92.5~1850ng范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999;平均回收率98.64%,RSD为1.47%。结论:所建立的方法准确、可靠、专属性强,可用于止眩胶囊制剂的质量控制。
【关键词】 止眩胶囊;丹酚酸B;高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2019)7-0031-02
Abstract:Objective To establish a method for the determination of salvianolic acid B in zhixuan capsule. Methods HPLC and waters xterra C18 column (4.6 mm×250 mm, 5μm) were adopted,with methanol: acetonitrile (3∶[KG-*3/5]1) - 1.0% formic acid(34∶[KG-*3/5]66) as the mobile phase at the flow rate of 1.0 ml/min.The column temperature was set at 30 ℃,and the UV detection wavelength was 286 nm.Results the injection amount of salvanolic acid B in the range of 92.5 ~ 1850ng had a good linear relationship with the peak area, r=0.9999. The average recovery was 98.64% and the RSD was 1.47%.Conclusion the method is accurate, reliable and specific, and can be used for the quality control of zhixuan capsule.
Keywords:Zhixuan Capsule; Salvianolic Acid B; HPLC
止眩膠囊由丹参、当归、延胡索、鸡血藤、莪术、蒲公英、石决明、薏苡仁、夏枯草、泽泻、续断、桃仁、醋三棱、川芎等14味药物组成,具有活血化瘀、通脉止眩等功效,适用于原发性高血压。该胶囊为医院制剂,原有质量标准较低,不能全面反映制剂质量状况,为更好地控制该制剂的内在质量,提高标准,拟增加含量测定等内容,方中以丹参为君药,走血分、通血脉,攻擅活血化瘀,现代医学研究表明,丹参具有扩张冠状动脉,增加冠状血流量,促进毛细管血管网开放,扩张血管等作用[1]。基于此,笔者选择丹参作为控制指标,建立了其有效成分丹酚酸B的含量测定方法。
1 仪器与材料
1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪(2998二极管阵列检测器,美国Waters);AUW120D型电子分析天平(日本岛津);BRANSONIC 超声波清洗机(美国BRANSON);Medium-s300超纯水器(四川优普超纯科技有限公司)。
1.2 材料 丹酚酸B对照品(批号:111562-201514,中国食品药品检定研究院);止眩胶囊(批号:180101、180102、180103,自制);乙腈为色谱纯,水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品1.85mg,置10mL棕色量瓶中,加75%甲醇至刻度,摇匀,制得每1mL含0.185mg的溶液,即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 取本品内容物1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇50mL,密塞,称定重量,超声处理(功率150W,频率40kHz)30min,放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,取续滤液,即得。
2.1.3 阴性对照溶液的制备按处方比例依法配制除丹参以外的阴性制剂,精密称取适量,按“2.1.2”项下方法制备阴性对照溶液。
2.2 色谱条件 色谱柱:Waters xterra C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇乙腈(3∶[KG-*3/5]1)-1.0%甲酸溶液(34∶[KG-*3/5]66);检测波长:286 nm;流速:1 mL/min;进样量:10μL。
2.3 含量测定方法学考察
2.3.1 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL,注入液相色谱仪中,记录色谱图(如图1所示)。试验表明,阴性对照溶液的色谱峰中,在丹酚酸B对应的位置上无干扰,专属性较强。
2.3.2 线性关系的考察 精密量取“2.1.1”项下对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0mL至2mL量瓶中,用75%甲醇定容,得不同浓度对照品溶液,分别进样10μL,测定峰面积积分值,以峰面积积分值为纵坐标,进样量ng为横坐标作图,得一直线回归方程:Y=1 102.1X-58097,r=0.999 9,表明丹酚酸B在进样量92.5~1 850 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.3.3 精密度试验 取“2.1.1”项下对照品溶液,进样10μL,连续进样6次,测定峰面积。结果丹酚酸B峰面积积分值RSD值为0.58%(n=6),表明仪器的精密度良好。
2.3.4 重复性试验 取批号180101的止眩胶囊样品,称取6份,精密称定,按“2.1.2”项下方法制备溶液,测定峰面积积分值,计算平均含量为5.18mg/g,RSD值为0.49%(n=6)。表明本方法重复性良好。
2.3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液,在室温下放置,于0、2、4、6、8、10h分别进样10μL,并测定峰面积,结果RSD为1.32%(n=6)。表明供试品溶液在10h内基本稳定。
2.3.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(批号180101:5.18 mg/g)6份,分别精密加入丹酚酸B对照品适量,按“2.1.2”项下方法制备溶液,测定,计算回收率。结果见表1。
2.4 样品含量测定 取不同批号止眩胶囊3批(批号:180101、180102、180103),按“2.1.2”项下方法制备溶液,进样测定,记录峰面积,计算样品中丹酚酸B的含量,分别为5.18 mg/g、5.20 mg/g、5.16 mg/g。
3 讨论
丹参为本处方的君药,丹酚酸B为丹参的主要有效成分[2-3],故选择丹酚酸B作为控制本品质量的指标成分。
在流动相的选择上,考察了乙腈-0.1%磷酸溶液(22∶[KG-*3/5]78)[2],乙腈-甲醇-甲酸-水(10∶[KG-*3/5]30∶[KG-*3/5]1∶[KG-*3/5]59)[3]和甲醇:乙腈(3∶[KG-*3/5]1)-1.0%甲酸溶液(34∶[KG-*3/5]66)的流動相体系,通过比较出峰时间、峰形、拖尾因子、分离度等,选择甲醇乙腈(3∶[KG-*3/5]1)-1.0%甲酸溶液(34∶[KG-*3/5]66)为本方法的流动相体系。
在提取溶剂及提取方式的选择上,考察了不同的提取溶剂(70%乙醇[2]、75%甲醇[4]、甲醇[5])以及提取方式(加热回流、超声处理、索氏提取)对所测组分提取效果的影响,综合考虑提取率以及操作的便捷性,确定提取方式为75%甲醇超声处理30min。
上述三批止眩胶囊中丹酚酸B含量测定来看,结果重现性较好,表明本文所建立的方法适用于该制剂的质量控制,对于原药材、饮片的选择,制剂的生产,存储环境的控制以及有效期的考察等方面可以起到数据支撑的作用。
参考文献
[1]刘慧.丹参有效成分在心血管药理学研究中的应用[J].现代中西医结合杂志,2008,17(34):5397.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015.
[3]王洋,陈涛,潘霖,等.液质联用技术在丹参成分分析中的应用[J].中草药,2014,45(23):3494.
[4]张黎莉,倪健,原素敏,等.高效液相色谱法测定冠心丹参胶囊中丹酚酸B的含量[J].北京中医药大学学报(中医临床版),2007,14(2):39.
[5]张永东,钟颖,谭鸿毅,等.高效液相色谱法测定复方丹参喷雾剂中丹酚酸B和丹参酮IIA 的含量[J].中南药学,2010,8(6):435.
(收稿日期:2019-01-18 编辑:陶希睿)
作者简介:郭钦安(1983-),男,汉族,本科,主管中药师,研究方向为中药材、中成药质量控制。E-mail:guoqinan123@163.com
通信作者:
【摘 要】 目的:建立止眩胶囊制剂中丹酚酸B的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法:色谱柱waters xterra C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇:乙腈(3∶[KG-*3/5]1)-1.0%甲酸溶液(34∶[KG-*3/5]66),流速1mL/min,柱温:30℃,检测波长286nm。结果:丹酚酸B的进样量在92.5~1850ng范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999;平均回收率98.64%,RSD为1.47%。结论:所建立的方法准确、可靠、专属性强,可用于止眩胶囊制剂的质量控制。
【关键词】 止眩胶囊;丹酚酸B;高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2019)7-0031-02
Abstract:Objective To establish a method for the determination of salvianolic acid B in zhixuan capsule. Methods HPLC and waters xterra C18 column (4.6 mm×250 mm, 5μm) were adopted,with methanol: acetonitrile (3∶[KG-*3/5]1) - 1.0% formic acid(34∶[KG-*3/5]66) as the mobile phase at the flow rate of 1.0 ml/min.The column temperature was set at 30 ℃,and the UV detection wavelength was 286 nm.Results the injection amount of salvanolic acid B in the range of 92.5 ~ 1850ng had a good linear relationship with the peak area, r=0.9999. The average recovery was 98.64% and the RSD was 1.47%.Conclusion the method is accurate, reliable and specific, and can be used for the quality control of zhixuan capsule.
Keywords:Zhixuan Capsule; Salvianolic Acid B; HPLC
止眩膠囊由丹参、当归、延胡索、鸡血藤、莪术、蒲公英、石决明、薏苡仁、夏枯草、泽泻、续断、桃仁、醋三棱、川芎等14味药物组成,具有活血化瘀、通脉止眩等功效,适用于原发性高血压。该胶囊为医院制剂,原有质量标准较低,不能全面反映制剂质量状况,为更好地控制该制剂的内在质量,提高标准,拟增加含量测定等内容,方中以丹参为君药,走血分、通血脉,攻擅活血化瘀,现代医学研究表明,丹参具有扩张冠状动脉,增加冠状血流量,促进毛细管血管网开放,扩张血管等作用[1]。基于此,笔者选择丹参作为控制指标,建立了其有效成分丹酚酸B的含量测定方法。
1 仪器与材料
1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪(2998二极管阵列检测器,美国Waters);AUW120D型电子分析天平(日本岛津);BRANSONIC 超声波清洗机(美国BRANSON);Medium-s300超纯水器(四川优普超纯科技有限公司)。
1.2 材料 丹酚酸B对照品(批号:111562-201514,中国食品药品检定研究院);止眩胶囊(批号:180101、180102、180103,自制);乙腈为色谱纯,水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品1.85mg,置10mL棕色量瓶中,加75%甲醇至刻度,摇匀,制得每1mL含0.185mg的溶液,即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 取本品内容物1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇50mL,密塞,称定重量,超声处理(功率150W,频率40kHz)30min,放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,取续滤液,即得。
2.1.3 阴性对照溶液的制备按处方比例依法配制除丹参以外的阴性制剂,精密称取适量,按“2.1.2”项下方法制备阴性对照溶液。
2.2 色谱条件 色谱柱:Waters xterra C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇乙腈(3∶[KG-*3/5]1)-1.0%甲酸溶液(34∶[KG-*3/5]66);检测波长:286 nm;流速:1 mL/min;进样量:10μL。
2.3 含量测定方法学考察
2.3.1 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL,注入液相色谱仪中,记录色谱图(如图1所示)。试验表明,阴性对照溶液的色谱峰中,在丹酚酸B对应的位置上无干扰,专属性较强。
2.3.2 线性关系的考察 精密量取“2.1.1”项下对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0mL至2mL量瓶中,用75%甲醇定容,得不同浓度对照品溶液,分别进样10μL,测定峰面积积分值,以峰面积积分值为纵坐标,进样量ng为横坐标作图,得一直线回归方程:Y=1 102.1X-58097,r=0.999 9,表明丹酚酸B在进样量92.5~1 850 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.3.3 精密度试验 取“2.1.1”项下对照品溶液,进样10μL,连续进样6次,测定峰面积。结果丹酚酸B峰面积积分值RSD值为0.58%(n=6),表明仪器的精密度良好。
2.3.4 重复性试验 取批号180101的止眩胶囊样品,称取6份,精密称定,按“2.1.2”项下方法制备溶液,测定峰面积积分值,计算平均含量为5.18mg/g,RSD值为0.49%(n=6)。表明本方法重复性良好。
2.3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液,在室温下放置,于0、2、4、6、8、10h分别进样10μL,并测定峰面积,结果RSD为1.32%(n=6)。表明供试品溶液在10h内基本稳定。
2.3.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(批号180101:5.18 mg/g)6份,分别精密加入丹酚酸B对照品适量,按“2.1.2”项下方法制备溶液,测定,计算回收率。结果见表1。
2.4 样品含量测定 取不同批号止眩胶囊3批(批号:180101、180102、180103),按“2.1.2”项下方法制备溶液,进样测定,记录峰面积,计算样品中丹酚酸B的含量,分别为5.18 mg/g、5.20 mg/g、5.16 mg/g。
3 讨论
丹参为本处方的君药,丹酚酸B为丹参的主要有效成分[2-3],故选择丹酚酸B作为控制本品质量的指标成分。
在流动相的选择上,考察了乙腈-0.1%磷酸溶液(22∶[KG-*3/5]78)[2],乙腈-甲醇-甲酸-水(10∶[KG-*3/5]30∶[KG-*3/5]1∶[KG-*3/5]59)[3]和甲醇:乙腈(3∶[KG-*3/5]1)-1.0%甲酸溶液(34∶[KG-*3/5]66)的流動相体系,通过比较出峰时间、峰形、拖尾因子、分离度等,选择甲醇乙腈(3∶[KG-*3/5]1)-1.0%甲酸溶液(34∶[KG-*3/5]66)为本方法的流动相体系。
在提取溶剂及提取方式的选择上,考察了不同的提取溶剂(70%乙醇[2]、75%甲醇[4]、甲醇[5])以及提取方式(加热回流、超声处理、索氏提取)对所测组分提取效果的影响,综合考虑提取率以及操作的便捷性,确定提取方式为75%甲醇超声处理30min。
上述三批止眩胶囊中丹酚酸B含量测定来看,结果重现性较好,表明本文所建立的方法适用于该制剂的质量控制,对于原药材、饮片的选择,制剂的生产,存储环境的控制以及有效期的考察等方面可以起到数据支撑的作用。
参考文献
[1]刘慧.丹参有效成分在心血管药理学研究中的应用[J].现代中西医结合杂志,2008,17(34):5397.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015.
[3]王洋,陈涛,潘霖,等.液质联用技术在丹参成分分析中的应用[J].中草药,2014,45(23):3494.
[4]张黎莉,倪健,原素敏,等.高效液相色谱法测定冠心丹参胶囊中丹酚酸B的含量[J].北京中医药大学学报(中医临床版),2007,14(2):39.
[5]张永东,钟颖,谭鸿毅,等.高效液相色谱法测定复方丹参喷雾剂中丹酚酸B和丹参酮IIA 的含量[J].中南药学,2010,8(6):435.
(收稿日期:2019-01-18 编辑:陶希睿)