【摘 要】
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目的 研究褪黑素(melatonin,MT)抑制脂多糖(lipopolysaccharid,LPS)诱导的血管内皮细胞焦亡的潜在机制.方法 采用LPS培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)建立内皮细胞焦亡模型,将细胞分为对照组、LPS组、褪黑素组、miR-325-3p模拟物组及miR-325-3p抑制剂组等进行培养.采用细胞计数试剂盒-8检测褪黑素对血管内皮细胞活力的影响;实时聚合酶链反应和免疫印迹法检测miR-325-3p及其靶基
【机 构】
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江苏省省级机关医院肾内科,江苏南京210024
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目的 研究褪黑素(melatonin,MT)抑制脂多糖(lipopolysaccharid,LPS)诱导的血管内皮细胞焦亡的潜在机制.方法 采用LPS培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)建立内皮细胞焦亡模型,将细胞分为对照组、LPS组、褪黑素组、miR-325-3p模拟物组及miR-325-3p抑制剂组等进行培养.采用细胞计数试剂盒-8检测褪黑素对血管内皮细胞活力的影响;实时聚合酶链反应和免疫印迹法检测miR-325-3p及其靶基因消皮素D(gasdermin D,GSDMD)、细胞焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1、白介素(interleukin,IL)-1β和IL-18在血管内皮细胞焦亡模型中的表达水平;利用荧光素酶报告试验研究miR-325-3p和GSDMD之间的相关性.结果 MT可抑制HUVEC因LPS诱导的细胞焦亡.与对照组相比,MT处理后HUVEC中GSDMD蛋白表达显著下调,差异具有统计学意义(P＜0.05).双荧光素酶基因报告试验表明,GSDMD是miR-325-3p的直接靶点.与对照组相比,转染miR-325-3p模拟物的HUVEC中GSDMD表达量显著下调,差异具有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,MT可显著增强miR-325-3p表达,并诱导GSDMD表达量下调.结论 MT可通过上调miR-325-3p靶向下调GSDMD表达,进而抑制LPS诱导的细胞焦亡.
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