【摘 要】
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目的 观察复制缺陷型重组腺病毒载体介导酸性成纤维生长因子(aFGF)对体外培养的兔角膜内皮细胞(RCEC)的感染效率和促增殖作用.方法 293A细胞扩增复制缺陷型重组腺病毒,选用细胞半数感染剂量(TCID50)法测定病毒滴度.体外培养RCEC,用携带报告基因(LacZ)的重组腺病毒(Ad-LacZ)感染RCEC,二甲基甲酰胺(X-gal)染色估计瞬时感染效率,将含aFGF的重组腺病毒(Ad-aFG
【机 构】
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200433,上海,第二军医大学第一附属医院眼科,200433,上海,第二军医大学第一附属医院眼科,第二军医大学微生物教研室,200433,上海,第二军医大学第一附属医院眼科,200433,上海,第二
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目的 观察复制缺陷型重组腺病毒载体介导酸性成纤维生长因子(aFGF)对体外培养的兔角膜内皮细胞(RCEC)的感染效率和促增殖作用.方法 293A细胞扩增复制缺陷型重组腺病毒,选用细胞半数感染剂量(TCID50)法测定病毒滴度.体外培养RCEC,用携带报告基因(LacZ)的重组腺病毒(Ad-LacZ)感染RCEC,二甲基甲酰胺(X-gal)染色估计瞬时感染效率,将含aFGF的重组腺病毒(Ad-aFGF)感染RCEC,RT-PCR 、Western blot分别检测aFGF转录及蛋白质表达情况,噻唑盐(MTT)法检测转基因细胞增殖情况.结果病毒滴度为2×108 pfu/ml;重组腺病毒感染RCEC 24 h后即可检测到外源基因表达,当感染倍数(MOI)值等于20时,Ad-LacZ对RCEC的感染效率为100%,感染Ad-aFGF对RCEC增殖有促进作用(F=217.107,P<0.05).结论复制缺陷型重组腺病毒载体介导的外源基因在RCEC中可有效表达,感染Ad-aFGF对RCEC增殖具有促进作用.(中华眼科杂志,2004,40:156-159)
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