【摘 要】
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本试验的目的在于构建猪pLV-miR-183慢病毒表达载体并检测其在猪肾细胞(PK15)中的表达情况。以巴马小型猪基因组DNA为模板，利用PCR克隆miR-183前体及部分侧翼序列，并使用T4连接
【基金项目】
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国家自然科学基金(81860150);广西科技重大专项(桂科AA17292002);国家现代农业产业技术体系广西生猪产业产业创新建设项目(nycytxgxcxtd-15-01);广西自然科学基金(2017GXNSFBA198157; 2018GXNSFAA294038)共同资助
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本试验的目的在于构建猪pLV-miR-183慢病毒表达载体并检测其在猪肾细胞(PK15)中的表达情况。以巴马小型猪基因组DNA为模板，利用PCR克隆miR-183前体及部分侧翼序列，并使用T4连接酶将其连入pLV-CMV-MCS-EF1载体，构建pLV-miR-183慢病毒表达载体。将PCR和测序鉴定为阳性的miR-183重组质粒转染PK15细胞，利用荧光倒置显微镜检测其转染效率。结果显示，miR-183扩增序列长度329bp，与参考序列一致。将阳性的pLV-miR-183重组质粒转染PK15细胞48h后，在荧光显微镜下检测到较强的绿色荧光蛋白表达，并通过qRT-PCR验证其较高的表达水平，说明所构建的pLV-miR-183慢病毒载体在PK15细胞中具有较高的表达活性。本研究成功构建了猪miR-183慢病毒表达载体，为后续研究miR-183在疾病作用机制方面奠定了一定的理论基础。
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