【摘 要】
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目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)联合氯化锶对人脐带间充质干细胞(hUCMSV)的增殖和分化的影响.方法 体外培养hUCMSC,实验分为3组,空白组:10%胎牛血清+DMEM培养基,对照组:10
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科
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目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)联合氯化锶对人脐带间充质干细胞(hUCMSV)的增殖和分化的影响.方法 体外培养hUCMSC,实验分为3组,空白组:10%胎牛血清+DMEM培养基,对照组:10%胎牛血清+DMEM培养基+成骨培养基,实验组:10%胎牛血清+DMEM培养基+BMP-2+氯化锶,噻唑蓝(MTT)比色法观察hUCMSC的增殖效果,并检测3组不同培养基培养后hUCMSC的碱性磷酸酶(ALP)活性变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测量不同组hUCMSC的骨桥蛋白(OPN)、ALP、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)的mRNA表达,蛋白印迹法检测Smad和p38蛋白表达的变化.Yon kossa染色实验观察人脐带间充质干细胞钙结节的形成.结果 实验组的hUCMSC增殖率在第5天和第7天明显高于空白组和对照组(P＜0.05).实验组细胞在第5天,碱性磷酸酶活性由(33.443±9.061)U/g.prot增加到(80.209±17.011)U/g.prot,在第14天,实验组的碱性磷酸酶活性可以高达(145.705±45.871)U/g.prot,与空白组和对照组比较都有明显增加(P＜0.05).在实验组人脐带间充质干细胞的碱性磷酸酶(ALP)mRNA出现高表达(P＜0.05).空白组的OPN表达很弱,而对照组和实验组的OPN出现明显的表达(P＜0.05).对比空白组和对照组,实验组COL1的表达可见明显增强(P＜0.05).实验组中hUCMSC的Smad1/5/8蛋白出现高表达(P＜0.05).空白组的p38蛋白表达很弱,而对照组和实验组的p38蛋白出现明显的表达(P＜0.05),含有BMP-2和氯化锶的培养基中培养28 d后,可以看到hUCMSC形成大量的钙结节.结论 联合骨形态发生蛋白-2和氯化锶对hUCMSC细胞增殖和成骨诱导分化都有促进作用.
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