【摘 要】
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目的探讨微小RNA-519b-3p（miR-519b-3p）对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响及其在喉癌发生发展过程中的作用及机制.方法通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）和流式细胞仪分别检测转染miR-519b-3p类似物前后Hep-2细胞生长和细胞周期的变化,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测细胞中相关基因和蛋白的表达.实时定量RT-PCR技术检
【机 构】
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目的探讨微小RNA-519b-3p（miR-519b-3p）对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响及其在喉癌发生发展过程中的作用及机制.
方法通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）和流式细胞仪分别检测转染miR-519b-3p类似物前后Hep-2细胞生长和细胞周期的变化,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测细胞中相关基因和蛋白的表达.实时定量RT-PCR技术检测48对喉癌组织及癌旁组织中miR-519b-3p的表达水平.
结果喉癌组织中miR-519b-3p的表达水平明显低于癌旁组织（S△Ct=2.989,f =2.693,P＜0.01）.miR-519b-3p类似物能显著抑制Hep-2细胞的增殖,使细胞周期被阻滞在G2/M期（10.29%±4.63%,（x）±s,t=4.395,P＜0.05）,并明显减少S期细胞（7.56%±2.05%,t=3.555,P＜0.05）,使细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin dependent kinase 1,CDKl）表达显著增加,而显著抑制CDK2和细胞周期蛋白A（Cyclin A）的表达.RT-PCR和Western blot结果显示,miR-519b-3p类似物在不影响HuR和环氧化酶-2（cyclooxgenase-2,COX-2）mRNA表达水平情况下,却明显下调其蛋白表达水平.
结论miR-519b-3p在喉癌组织中低表达,它可能作为抑癌因子通过翻译后抑制HuR和COX-2的表达而使细胞周期被阻滞在G2/M期,从而抑制细胞生长.
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