【摘 要】
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普鲁兰酶 （pullulanase）可催化支链淀粉、普鲁兰糖等多糖大分子中的α-1，6糖苷键水解，是最重要的淀粉酶之一。为提高普鲁兰酶发酵水平，该研究将Bacillus deramificans的普鲁兰酶表达于枯草芽孢杆菌WB600。首先考察了天然组成型、合成组成型、诱导型和自诱导型等强启动子的对产酶的影响。结果显示，合成组成型P566获得的普鲁兰酶活达到58.1 U/mL，较初优化前的启动子P4
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（32071474和31771913）；
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普鲁兰酶 （pullulanase）可催化支链淀粉、普鲁兰糖等多糖大分子中的α-1，6糖苷键水解，是最重要的淀粉酶之一。为提高普鲁兰酶发酵水平，该研究将Bacillus deramificans的普鲁兰酶表达于枯草芽孢杆菌WB600。首先考察了天然组成型、合成组成型、诱导型和自诱导型等强启动子的对产酶的影响。结果显示，合成组成型P566获得的普鲁兰酶活达到58.1 U/mL，较初优化前的启动子P43提高96%。然后基于单因素和响应面优化确定了最佳培养基组成为：玉米浆14.8 g/L，蛋白胨7.3 g/L，葡萄糖17.5 g/L，Ca2+ 1.2 mmol/L。在该条件下，重组普鲁兰酶活力提高至129.4 U/mL。最后，在5 L罐中进行葡萄糖补料控制，重组菌发酵53 h后酶活达到226.4 U/mL。研究结果为应用枯草芽孢杆菌生产普鲁兰提供了方法学参考。
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