【摘 要】
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目的 观察白藜芦醇对小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)过氧化氢(H2O2)氧化应激损伤的保护作用.方法 使用不同浓度的H2O2(100、300、500、800、1 000 μmol/L),作用不同时间(6、1
【机 构】
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430060,武汉大学人民医院麻醉科430060,武汉大学人民医院神经外科;
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目的 观察白藜芦醇对小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)过氧化氢(H2O2)氧化应激损伤的保护作用.方法 使用不同浓度的H2O2(100、300、500、800、1 000 μmol/L),作用不同时间(6、12、24 h)处理bEnd.3细胞,建立氧化应激模型;然后采用不同浓度的白藜芦醇(RSV) (0.1、1.0、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0μmol/L)与H2O2共处理bEnd.3细胞.实验为对照组、H2 O2组、RSV+H2O2组.用细胞增殖检测试剂盒(CCK-8法)检测细胞存活率;用乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒检测LDH和SOD的活力;用Hoechst 33342以及流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot法检测β-连环蛋白(β-catenin)、蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (bcl-2)、活化酪半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved Caspase-3)的表达水平.结果 500 μmol/L H2O2刺激bEnd.3细胞24h,细胞的存活率降至50％左右(P＜0.05);与H2O2组比较,bEnd.3细胞经实验浓度的RSV(10 μmol/L)处理后存活率由(46.5±5.0)％升高至(70.4±3.4)％(P＜0.05),LDH活力由(161.0±2.9)％降至(108.0±3.3)％(P＜0.05),SOD活力由(23.0±5.5)％升高至(50.7±14.7)％(P＜0.05),同时细胞凋亡率由(7.12±0.59)％降至(2.24±0.37)％(P＜0.05);Western blot结果显示:RSV+H2 O2组β-catenin、磷酸化Akt (p-Akt)、bcl-2蛋白表达增强,cleaved Caspase-3蛋白表达减弱(P＜0.05).结论 实验剂量的RSV对bEnd.3细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能通过介导磷酸肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路和稳定细胞骨架而实现.
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